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《來航雞FOXL2蛋白單克隆抗體的制備.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、-750·中國免疫學(xué)雜志2013年第29卷doi：10．3969／j．issn．1000~84X．2013．07．019來航雞FOXL2蛋白單克隆抗體的制備魯毅徐萍①②李任峰李超英③李學(xué)斌王三虎陳明艷劉衛(wèi)鄧佳霖②(河南科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)院，新鄉(xiāng)453003)中國圖書分類號(hào)Q38$831文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)1000-484X(2013)07．0750-05[摘要]目的：制備來航雞FOXL2蛋白的單克隆抗體。方法：利用生物信息學(xué)的方法分別預(yù)測來航雞FOXL2蛋白最有可能的線性表位，并人工合成多肽，高效液相色譜分析其純度，與KLH偶聯(lián)后免疫小鼠制備其單克隆抗體
2、，用間接ELISA方法和免疫印跡進(jìn)行篩選，然后對(duì)篩選出來的細(xì)胞株進(jìn)行一般性質(zhì)測定、親和常數(shù)測定、Ic測定。結(jié)果：合成多肽純度>95％，細(xì)胞融合后，其平均融合率為75％，并用間接ELISA方法和Westernblot篩選出1條可與FOXL2蛋白發(fā)生明顯反應(yīng)的細(xì)胞株c2；經(jīng)測定，c2細(xì)胞株上清效價(jià)為1／128，腹水效價(jià)為1／256，其亞型屬于IgGl，雜交瘤細(xì)胞染色體為102條，腹水單抗的蛋白含量為1．576g／L，其親和常數(shù)為2．12×10L／mol，IC值為0．08247L。結(jié)論：成功制備了FOXL2蛋白單克隆抗體，為下一步深入研究FOXL2蛋白奠定基
3、礎(chǔ)。[關(guān)鍵詞]來航雞；FOXL2；單克隆抗體；表位PreparationofamonoclonalantibodyspecifictoFOXL2proteinofLeghornchickenLUYi，XU，LIRen—，LIChao—Ying，LIXue—Bin，WANGSan—Hu，CHENMing—Yah，LIUWei，DENGJia—Lin．SchoolofAnimalScience，HenanInstituteofScienceandTechnology，Xinxiang453003，China[Abstract]Objective：Topre
4、paremonoclonalantibodyofLeghornchickenFOXL2protein．Methods：First，bioinformaticsmethodswereusedtopredictitsmostpossibleepitopes，thenpolypeptidesweresynthesised，puritywereanalysisedbyliquidchroma—tography，coupledwithKLH．Later，themicewereimmunizedbythepolypeptideswhichcoupledwithKL
5、H．AfterfusedbetweenthespleniccellofimmunizedmiceandNSOmyelomacell，theindirectELISAandWesternblotwereusedtodetectwhetherthehybridomacellcansecreteantibodyagainstpolypeptideandFOXL2protein．Last，thegeneralnature，bindingcurveandIC50ofmonoclonalanti—bodyweremeasured．Results：Itwasfoun
6、dthatthepurityofartificialpolypeptideswereall>95％．Aftercellfusion，itsfusionratewas75％，andonecelllineswerescreenedbyindirectELISAandWestenblot；celllinesupernatanttiterwas1／128，theascitestiterwas1／256，IgG1type，had102cellchromosome，asciticfluidproteincontent1．576g／L；itsaffinitycons
7、tantwas2．12×10L／mol，IC50valuewas0．08247L．Conclusion：WesuccessfullypreparedtheFOXL2proteinmonoclonalantibody，thisworkshouldhelpedforadeepresearchtoFOXL2．[Keywords]Leghornchicken；FOXL2；Monoclonalantibody；EpitopeFOXL2基因(wingedhelix／forkheadtranscription發(fā)揮著重要作用]2002年，F(xiàn)uhrer等l8科學(xué)家fac
8、torgene2，F(xiàn)OXL2)屬Fox超家族成員。據(jù)研究，發(fā)現(xiàn)FOXL2不僅在抗擊卵泡凋亡、維
