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《蛇毒類凝血酶鼠單克隆抗體的制備.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、物技術(shù)通訊一-...Joee84赤ETERSrINBIOTECHN()I()GVol0N149991蛇毒類凝血酶鼠單克隆抗體的制備劉樹玲杜勇陳萬(wàn)榮徐靜王海濤7(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所北京001)1,,摘要采用雜交瘤技術(shù)獲得了4株穩(wěn)定分泌抗蛇毒類凝血酶的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株均屬.,一’一2,一’`44X104X104x103IgGI鏈株雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液效價(jià)為~腹水效價(jià)為~2又一5。10;;關(guān)鍵詞類凝血酶單克隆抗體酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)PreParationandidentifieationofmonoclonalantibodies一againthrombinlikeen
2、zymeinsnakevenomuun,uon,enanron,un,anataoLiShligDYgChWgXJigWgHi,s:`e`roooa,,e00,caea`cacence:,e,王(Itirt擴(kuò)屆bil刀did川11舒AdMilit勺材dilSiBiji9100071)EP呷Ofstraetonoeonaantoeseagansttron:eenzymensnaevenoAbMllibdi(MAb)ihmbilik(TLE)ikmwereprodueedbyfusingSpZ0myelomaeellswithspleeneellsfromBalb/emieeimmu
3、nizedwith/.FourroaeenesseeretingspeeeantiboesaganstTLEwereotaineyTLEhybidmllliifidiibdb.srrass,ssereeninghybidomaeulturesupenatntuingElISAwithTLEonolidphaseAllofMeAb..一l2,wereIgGIKThetitersofhybridomaeulturesupernatantsrangedfrom4Xlo32又10一and~.一咭一一”ro32X10inaseitesfm4X10~一Keywordstroneenzyme;
4、e;ELISAhmbilikMAb一,`troneenzymeTLE)1,-類凝血酶(hmbilik[是薪閉液為2寫B(tài)SA樣品和二抗稀釋液為PBS,一。蛇蛇毒中的一種蛋白酶它能顯著降低血漿纖維蛋een20Tw,,.白原含量水平適用于預(yù)防高粘易凝的血液流變從12免疫動(dòng)物,T而達(dá)到去纖低凝的防栓作用目前臨床上主要用于初次免疫用LE加等量福氏完全佐劑皮下多。,防治血栓性血管閉塞國(guó)外已有精制的類凝血酶商點(diǎn)注射(每只鼠50~100拌g)2周后用不完全福氏,,、。品國(guó)內(nèi)也已有數(shù)十家廠商運(yùn)用生化方法從蛇毒中佐劑加等量TLE劑量途徑同第一次2周后取小,。分離純化類凝血酶并已用于臨床為進(jìn)一步改進(jìn)其
5、。,。鼠眼球血測(cè)定效價(jià)融合前3天再加強(qiáng)免疫一次,··e[23飛純化工藝和深人研究其作用的機(jī)理我們制備了類13TLEMAb的制備,。凝血酶的單克隆抗體結(jié)果如下,,無(wú)菌操作取免疫小鼠脾臟制備脾細(xì)胞懸液按,常規(guī)方法與SpZ/0骨髓瘤細(xì)胞融合用HAT選擇1,材料和方法培養(yǎng)基培養(yǎng)融合后9~n天用ELISA法篩選陽(yáng)性,,克隆初次克隆時(shí)換HT培養(yǎng)液用有限稀釋法克.,。11試劑隆達(dá)到100%陽(yáng)性為止,·,xl護(hù)e[45]精制的類凝血酶相對(duì)分子質(zhì)量約25由l4TLEMAb的亞類鑒定`。IgGJ。本所生物生化制品廠提供羊抗鼠酶標(biāo)抗體為用96孔板條包被TIE(2拌g/ml)4C過(guò)夜用。ne,一一GIB
6、CO公司產(chǎn)品Hyclo公司生2BSAPBSeen胎牛血清為美國(guó)%封閉后加Tw20稀釋的不同株。。aC.產(chǎn)SpZ/O骨髓瘤細(xì)胞為本室傳Blb/小,代保存細(xì)胞培養(yǎng)上清液(每孔。1ml)室溫Zh洗板后加J。EIA:,鼠由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供IS封人酶標(biāo)記羊抗鼠lgG亞類(均12000稀釋)室溫一.:285劉樹玲等蛇毒類凝血酶鼠單克隆抗體的制備,,。,。19I`Zh后顯色判斷結(jié)果了亞類鑒定均屬gGI鏈,。關(guān)于制備TLEMAb的研究國(guó)內(nèi)外未見有報(bào)。,2結(jié)道我們用類凝血酶免疫Balbc/小鼠每次每只用果與討論,量50~10拼g就可以達(dá)到免疫效果免疫兩次后其,。.J110000以上取
7、脾細(xì)胞與SpZ/O21TIE單抗陽(yáng)性克隆的篩選效價(jià)可達(dá)細(xì)胞融,,,約10%經(jīng)3次克隆后大部分應(yīng)用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)融合4塊96孔合后其陽(yáng)性率不高,。,。4LEcAb的雜被篩去其原因有待分析解決我們對(duì)此項(xiàng)工作的研板融合率95%共獲得株分泌TM,,,TLEcAb的制TLE交瘤細(xì)胞株用有限稀釋法克隆化3次陽(yáng)性率達(dá)究剛開始M備成功對(duì)我們就,。、、的抗凝血作用機(jī)理的研究有一定的價(jià)值100%這4株分別命名為TLEBloTLED6并有可能。、。,。IT一B6TLEH3經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后分別制備腹水
