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《青蟹呼腸孤病毒和青蟹雙順?lè)醋硬《?1雙重巢式PCR檢測(cè)方法的建立-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)2013年7月，20(4)：808—815JournalofFisherySciencesofChina研究論文DoI：l0．3724／SP．J．1118．2013．00808青蟹呼腸孤病毒和青蟹雙順?lè)醋硬《荆?雙重巢式PCR檢測(cè)方法的建立張迪一，楊鏗，蘇友祿，馮娟，郭志勛1．中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，農(nóng)業(yè)部南海漁業(yè)資源開(kāi)發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510300；2．上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海201306摘要：青蟹呼腸孤病毒(mudcrabreovirus，MCRV)和
2、青蟹雙順?lè)醋硬《疽籰(mudcrabdicistrovirus一1，MCDV1)是從近年發(fā)生大規(guī)模死亡的養(yǎng)殖擬穴青蟹體內(nèi)分離的、對(duì)青蟹具有致病性的兩種病毒。它們常常同時(shí)存在，給青蟹養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失。在疾病的防治中，快速高效的病毒檢測(cè)方法對(duì)疾病診斷以及及時(shí)采取有效地防治措施具有重要的意義。本研究利用MCRV和MCDV-1基因保守區(qū)設(shè)計(jì)4對(duì)引物，建立了可同時(shí)檢測(cè)這兩種病毒的雙重巢式PCR(duplex．nestedPCR)檢測(cè)方法。研究發(fā)現(xiàn)該方法對(duì)兩種病毒的檢測(cè)限都可以達(dá)到l0個(gè)拷貝，并與鮑肌肉萎縮病毒(AbSV)、
3、蝦類傳染性表皮與造血組織壞死癥病毒(IHHNV)、大菱鲆紅體病虹彩病毒(TRBIV)、對(duì)蝦白斑綜合癥病毒(wssv)、魚類神經(jīng)壞死病毒(NNV)和貝類急性病毒性壞死癥病毒(AVNV)等水生動(dòng)物常見(jiàn)病毒均無(wú)交叉反應(yīng)，可以特異性地檢測(cè)兩種病毒。本方法具有高靈敏度、高特異性和簡(jiǎn)便快捷等特點(diǎn)，可作為一種快速診斷工具，檢測(cè)擬穴青蟹中的MCRV和MCDV-1基因。關(guān)鍵詞：擬穴青蟹：青蟹呼腸孤病毒；青蟹雙順?lè)醋硬《荆?；雙重巢式PCR中圖分類號(hào)：$945文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1005—8737一(2013)04—0808—08擬穴
4、青蟹(Scylla口，0口)(原被鑒定為rus．1，MCDV-1)J，2012年被國(guó)際病毒分類委員鋸緣青蟹(Scyllaserrata)¨)是中國(guó)東南沿海地區(qū)會(huì)(InternationalCommitteeonTaxonomyofVi—重要的海水養(yǎng)殖種類，2010年全國(guó)總產(chǎn)量達(dá)到了ruses，ICTV)~E式命名為青蟹病毒(MudCrabVi—l1．6萬(wàn)t【2]。但隨著養(yǎng)殖規(guī)模的逐步擴(kuò)大，不良環(huán)rus)剛。人工感染這兩種病毒的青蟹死亡率均達(dá)境因子、細(xì)菌、寄生蟲、病毒等因素導(dǎo)致青蟹病到100％L5，9]0“嗜睡病”流行性
5、廣、導(dǎo)致的死亡率高、害問(wèn)題不斷嚴(yán)重LjJ。危害嚴(yán)重，極大地限制了擬穴青蟹養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。2004年開(kāi)始在福建、廣東等多個(gè)省份發(fā)生的目前已報(bào)道的MCRV檢測(cè)方法有巢式逆轉(zhuǎn)錄養(yǎng)殖青蟹“嗜睡病”，死亡率接近70％【4】。從患“嗜PcR(nR_T-PCR)法u、反轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)睡病”的青蟹中分離到兩種病原：一種是青蟹呼(reversetranscriptionloop—mediatedisothermalampli—腸孤病毒(mudcrabreovirus，MCRV)J，亦稱鋸緣ficationassay,RT-LAMP
6、)[121等。這兩種方法檢出青蟹呼腸孤病毒(Scyllaserratareovirus，SsRV)；結(jié)果準(zhǔn)確可靠，但只能檢測(cè)一種病原，在混合感另一種是青蟹雙順?lè)醋硬《?mudcrabdicistrovi—染檢測(cè)中存在一定的局限性。因此，建立快速、收稿日期：2012—12-07；修訂日期：2013—03—09．基金項(xiàng)目：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2011A020102002)；廣東省海洋漁業(yè)科技推廣專項(xiàng)(A201001H04)；廣東省教育部產(chǎn)學(xué)研結(jié)合項(xiàng)目(2010B090400519)；中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)資助(2
7、012TS06)．作者簡(jiǎn)介：張迪(1987一)，女，碩士研究生，主要從事青蟹養(yǎng)殖病害研究．E-mail：zhangdil5@yahoo．tom．cn通信作者：郭志勛，研究員．E—mail：guozhixul@163．tom第4期張迪等：青蟹呼腸孤病毒和青蟹雙順?lè)醋硬《荆?雙重巢式PCR檢測(cè)方法的建立813注：“”指未進(jìn)行該檢測(cè)．一一Note：“”representsthedetectionwasnotperformed一一有效平衡了每個(gè)基因的擴(kuò)增效率，使之趨于相同。參考文獻(xiàn)：多重PCR體系因受影響因素較多，敏感性從【1
8、】林琪，李少菁，黎中寶，等．中國(guó)東南沿海青蟹屬(Scylla)l0～10copies[。的情況都存在，而巢式PCR的的種類組成[J]．水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2007，31(2)：211-219．靈敏度以第二輪擴(kuò)增為準(zhǔn)，通常在10～10cop—[2]中國(guó)農(nóng)業(yè)部漁業(yè)局．2011年中國(guó)漁業(yè)年鑒[M]．北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2011：180．ies[
