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《羅丹明6G熒光猝滅法測定痕量肝素.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、2014年5月分析試驗室V01．33No．5第33卷第5期ChineseJournalofAnalysisLaboratory601—603DOI：10．13595／j．cnki．issnl000—0720．2014．0140羅丹明6G熒光猝滅法測定痕量肝素吳雯輝，董存智(淮北師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，淮北235000)摘要：在pH8．0的緩沖體系中，肝素使得羅丹明6G的熒光發(fā)生明顯猝滅，羅丹明6G的熒光猝滅程度在一定范圍內(nèi)與肝素的濃度成正比，據(jù)此建立了熒光猝滅法測定痕量肝素的方法，并對體系的熒光猝滅機理進(jìn)行了討論。體系的激發(fā)波長為482n
2、m，發(fā)射波長為560nm，線性范圍為0．05—3．0mg／L，檢出限為6．1L。方法已應(yīng)用于肝素鈉注射液中肝素含量的測定。關(guān)鍵詞：羅丹明6G；肝素；熒光猝滅中圖分類號：0657．3文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1000—0720(2014)05—0601—03肝素為葡糖胺聚糖，是由葡萄糖胺磺酸、葡萄容至10mL，混勻后靜置20min。在激發(fā)波長為糖醛酸、艾杜糖醛酸組成的多糖鏈混合物，在水溶482nm，發(fā)射波長為560nm，靈敏度為“LOW”的條液中由于其酸性基團(tuán)的離解而成為帶多個負(fù)電荷件下測其熒光強度，其中含肝素者的熒光強度為的大陰離子，是蛋白多糖
3、的一種，在人體內(nèi)由肥大F，試劑空白為，計算△F=Fo—F。細(xì)胞分泌而自然存在于血液中，具有廣泛的生物學(xué)2結(jié)果與討論功能。肝素是目前世界上最有效和臨床用量最大2．1熒光光譜的抗凝血藥物，臨床上主要用于血栓栓塞性疾病、在pH8．0的硼酸一硼砂緩沖溶液中，羅丹明心肌梗死、心血管手術(shù)、心臟導(dǎo)管檢查、體外循環(huán)、6G在482nm和510nm處出現(xiàn)激發(fā)峰，實驗選擇激血液透析等?。肝素的檢測法有生物方法J、光發(fā)波長為482nm，其發(fā)射波長為560nm。羅丹明度法、電化學(xué)法，、共振散射法、熒光法，6G的熒光光譜如圖1所示。由圖1可知，肝素的等。本實驗發(fā)現(xiàn)，肝素
4、可與羅丹明6G發(fā)生反應(yīng)，存在使得羅丹明6G的熒光強度降低，在一定的濃致使羅丹明6G的熒光發(fā)生猝滅。在一定濃度范度范圍內(nèi)，羅丹明6G的熒光降低值與肝素的濃度圍內(nèi)，肝素的濃度與羅丹明6G的熒光猝滅程度呈呈線性關(guān)系?，F(xiàn)線性關(guān)系，據(jù)此，建立了測定痕量肝素的新方法。1實驗部分1．1儀器與試劑FP-6500熒光光度計(日本分光株式會社)。肝素鈉溶液：1．0g／L(4℃冰箱內(nèi)保存)，使用時稀釋至0．10g／L。羅丹明6G溶液：1．0×10～mol／L。pH8．0的硼酸一硼砂緩沖溶液。實驗用水均為16MQ的高純水，試劑均為分析純。1．2實驗方法圖1熒光光譜圖
5、在兩支具塞10mL比色管中依次加人pH8．0Fig．tFluorescencespectra的硼酸一硼砂緩沖溶液0．5mL，1．0×10molfL曲線1—3：p(肝素)=0，1，2mg／L；c(羅丹明6G)=5x的羅丹明6G溶液0．5mL，其中1支加入0．10L10～moL／L的肝素鈉溶液0．1mL，另1支為試劑空白，用水定收稿日期：2013—11—14E·mail：czdonghb@126．tom分析試驗室第33卷2．2酸度的影響求得方法的檢出限為6．1g／L。按照實驗方法，考察了不同pH下的Tris-HC1，2．7熒光猝滅機理討論硼酸一硼
6、砂，B．R，巴比妥鈉一HC1等緩沖溶液的影引起體系熒光猝滅的原因包括動態(tài)猝滅和靜響，實驗結(jié)果表明，硼酸一硼砂緩沖溶液中體系的態(tài)猝滅。動態(tài)猝滅過程遵循Stern．Volmer方程J：熒光猝滅效果最好。改變硼酸一硼砂緩沖溶液的／F=1+K[Q]=1+K0T0[Q]pH和加人量，實驗發(fā)現(xiàn)pH為8．0，加入量為恒定溫度為20℃，30℃時，測定體系熒光強0．5mL時體系的△F有最大值，因此，實驗選擇度隨肝素濃度([Q])的變化情況，實驗結(jié)果如圖pH8．0硼酸一硼砂緩沖溶液的加入量為0．5mL。2所示。由圖2知，F(xiàn)。／F～[Q]曲線呈線性關(guān)系，2．3羅丹
7、明6G用量20cI=，30℃下的K值隨溫度升高而減小改變羅丹明6G的用量，考察羅丹明6G的用(2．804×10L／mol·S和1．614×10量對測定的影響，實驗發(fā)現(xiàn)，隨著羅丹明6G溶液L／mol·S)，且遠(yuǎn)大于擴散碰撞速率常數(shù)2．0×加入量的改變△F先增加后減小，加入量為0．5mL10加L／mol·S～。因此，可認(rèn)為體系的熒光猝滅時△F有最大值，因此，選擇1．0mmol／L羅丹明屬于靜態(tài)猝滅。6G溶液的加入量為0．5mL。2．4反應(yīng)時間改變反應(yīng)時間，測定體系△與反應(yīng)時間的關(guān)系，實驗結(jié)果顯示，反應(yīng)時間在20～180min內(nèi)體系的△F保持不變。
8、實驗選擇反應(yīng)時間為20min。2．5共存物質(zhì)的影響在實驗條件下，考察了不同物質(zhì)對肝素測定的影響，當(dāng)肝素質(zhì)量濃度為1．0mg／L，實驗相對誤差在±5％以內(nèi)時，各種物質(zhì)
