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1、2014年1月中成藥January2014第36卷第1期ChineseTraditionalPatentMedicineVo1．36No．1[科研報道]補骨脂對小鼠肝細胞形態(tài)、肝功能及線粒體膜電位的影響張秀娟。，曹慧琪，邢志華，季宇彬(1．哈爾濱商業(yè)大學生命科學與環(huán)境科學研究中心生物安全評價研究所，黑龍江哈爾濱150076；2．國家教育部抗腫瘤天然藥物教育部工程研究中心，黑龍江哈爾濱150076；3．哈爾濱商業(yè)大學藥學院，黑龍江哈爾濱150076)摘要：目的探討補骨脂對小鼠肝功能的影響。方法選用昆
2、明種小鼠，連續(xù)灌胃28d，HE染色觀察補骨脂對小鼠肝細胞形態(tài)的影響；紫外分光光度法測定補骨脂對小鼠血清中谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)活性的影響；酶聯(lián)免疫吸附法檢測補骨脂對小鼠腫瘤壞死因子(TNF—)、白細胞介素一6(IL-6)活性的影響；流式細胞儀檢測補骨脂對小鼠肝細胞線粒體膜電位(△m)的影響。結果補骨脂能引起小鼠肝細胞腫脹、壞死，血清ALT、AST、TNF．0I、IL-6活性增加；肝細胞線粒體膜電位(△m)隨著給藥劑量的增加顯著降低。結論補骨脂連續(xù)服用對小鼠肝臟具有明顯的損傷。關
3、鍵詞：補骨脂；肝損傷；肝功能；細胞因子；線粒體膜電位中圖分類號：Pc285．5文獻標志碼：B文章編號：1001—1528(2014)01-0160-03doi：10．3969／j．issn．1001—1528．2014．01．039補骨脂是中醫(yī)臨床治療脾腎陽虛的常用補虛藥物?。北京醫(yī)用離心機廠LIM-2A；SUNRISE酶標儀，瑞士TE—傳統(tǒng)醫(yī)學認為補骨脂具有補腎助陽，固精縮尿，暖脾止瀉，CAN公司；流式細胞儀，美國BECK—COULTER公司；O—納氣平喘等功效，主治腎虛冷泄，遺尿尿頻，陽痿，遺
4、精，LYMPUSIX70倒置顯微鏡，Olympus公司。虛寒喘咳，腰膝冷痛等病癥；現(xiàn)代藥理學研究表明該藥2方法具有擴張冠狀動脈，抗菌，抗衰老的作用，對平滑肌有雙2．1實驗動物分組及給藥小鼠4O只，隨機分成4組，向調節(jié)作用，以及抗腫瘤等藥理活性。補骨脂藥材、炮分別為對照組、補骨脂組(6．0、3．0、1．5kg)，灌胃，制、化學、藥理作用及臨床應用等在國內外都有了多方面28d。的研究報道，但是長期使用補骨脂對機體損傷方面的研究2．2補骨脂對小鼠肝臟組織形態(tài)學的影響取小鼠肝臟適甚少。故本課題旨在通過觀察
5、肝臟病理組織、血清學、細量切成小塊，PBS沖洗，石蠟包埋，H．E．染色。胞學變化規(guī)律，分析補骨脂對小鼠肝損傷作用，并探討其2．3補骨脂對小鼠血清ALT、AST的影響眼球取血，安全用量范圍，為今后安全、合理、有效用藥提供理論3000r／min離心10min，分離血清，紫外分光光度法測定基礎。ALT、AST活性。1材料2．4補骨脂對小鼠血清TNF—、IL-6活性的影響眼球取1．1藥物補骨脂購自哈爾濱人民同泰藥店，經哈爾濱商血，3000r／min離心10min，分離血清，酶聯(lián)免疫吸附試業(yè)大學藥學院金哲雄
6、教授鑒定為豆科補骨脂屬植物補骨脂驗測定TNF一、IL-6活性。Psoraleacorylifolia的干燥成熟果實。2．5補骨脂對小鼠肝細胞線粒體膜電位的影響1．2動物昆明種小鼠(20±2)g，雌雄各半，合格證為2．5．1肝細胞的分離純化小鼠肝臟適量切成小塊，PBS黑動字第POOl01006號，由黑龍江中醫(yī)藥大學實驗動物中沖洗，胰酶37℃消化15rain，小牛血清中止，300目尼龍心提供。網過濾，1000r／min，10rain，棄上清，收集沉淀細胞，1．3試劑與儀器谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨
7、酶1000r／min離心10rain，棄上清，調整細胞密度約為1×(AST)、腫瘤壞死因子一13t(TNF—oL)試劑盒、白細胞介素一610個／mL。(IL一6)試劑盒，南京建成生物工程研究所；Adventurer萬2．5．2線粒體膜電位的測定取500細胞懸液，加染分之一電子天平，OHAUS公司；高速離心機，Beckman色液500tzL，使其終質量濃度為10g／mL，37℃孵育30Coulter；超細勻漿器，德國FLUKUF6／10；低速離心機，rain，加1mLPBS，1000r／min離心1
8、0min，棄上清，加收稿日期：2013-05—14基金項目：黑龍江省自然科學基金項目(D201043)作者簡介：張秀娟(1962～)，女，教授，博士生導師，研究方向：抗腫瘤藥物。E-marl：zhangmu77@163．COB通信作者：季宇彬，男，教授，博士生導師。1602014年1月中成藥January2014第36卷第1期ChineseTraditionalPatentMedicineVoI_36No．1性低劑量組較空白組有增加趨勢但沒有統(tǒng)計學意義，高、劉樹民．中藥藥物性肝損害
