淺談 ELISA 法檢測(cè)抗戊型肝炎病毒 IgM 抗體.pdf

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1、128世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘2014年第l4卷第8期·醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)·淺談ELISA法檢測(cè)抗戊型肝炎病毒IgM抗體王爰(黑龍江省七臺(tái)河市婦幼保健院，黑龍江七臺(tái)河154600)摘要：目的探討ELISA法檢測(cè)抗戊型肝炎病毒IgM抗體。方法運(yùn)用ELISA法檢測(cè)抗戊型肝炎病毒IgM抗體。結(jié)論檢測(cè)時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書要求操作，防止交叉污染。關(guān)鍵詞：檢測(cè)馀驗(yàn)；ELISA法；戊型肝炎；病毒抗體中圖分類號(hào)：R446．1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：BDOI：10．3969~．issn．1671—3141．2014．09．0950引言4．4加酶標(biāo)記物將HEV蛋白結(jié)構(gòu)區(qū)的3種重組抗原成分，包被于聚苯除空白孔外，其

2、余孔各加1OOffl酶標(biāo)記物。乙烯酶標(biāo)板的反應(yīng)孔中，加入待測(cè)血清或血漿，經(jīng)孵育若4．5孵育及洗滌存在特異性抗體將與固相的HEV抗原結(jié)合I”。充分沖洗反37cC水浴孵育30min，用洗板機(jī)洗板。洗板機(jī)先吸去板應(yīng)孔以祛除未結(jié)合成分，再將辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鼠抗孔內(nèi)液體，再以洗滌液注滿各孔靜置lmin后吸干，如此反人IgM抗體加入反應(yīng)孔中，酶結(jié)合物將結(jié)合到先前形成的復(fù)洗滌5次?？乖贵w復(fù)合物上，反復(fù)沖洗反應(yīng)孔，祛除未結(jié)合的酶結(jié)合4．6加底物物，然后向每孔中加入底物液一一四甲基聯(lián)苯胺(TMB)溶液。加TMB底物100l／孔，37℃閉光顯色10min，加終如果反應(yīng)體系有藍(lán)色反

3、應(yīng)，說(shuō)明有HE~特異性抗體的存在止液50l／孔。I2]4．7檢測(cè)0D值l標(biāo)本采集用MK2酶標(biāo)儀比色，以450nm(單波長(zhǎng))或450nm／630nm(雙波長(zhǎng))測(cè)各孔OD值。應(yīng)用新鮮的動(dòng)脈血或靜脈血2～3ml，離心(1500～3000r／min)分離血清。不能馬上進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本4．8結(jié)果審核在LIS系統(tǒng)審核結(jié)果。應(yīng)置于2～8℃保存，保存時(shí)間不能超過(guò)3d。樣本中不可添加疊氮鈉進(jìn)行防腐，一旦加入疊氮鈉，就會(huì)會(huì)影響標(biāo)本5質(zhì)量控制中辣根過(guò)氧化物酶的活性，影響檢測(cè)結(jié)果。5．1測(cè)定頻率2試劑每批標(biāo)本都應(yīng)設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。s為樣品OD值，CO為臨界值fCut—off)。2．1試劑來(lái)源

4、戊型肝炎病毒IgM抗體診斷試劑盒(由北京萬(wàn)泰生物5．2接受標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)有限公司提供)。當(dāng)臨界值血清的s／CO值超出X±2s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于警告狀態(tài)，應(yīng)予注意；當(dāng)臨界值血清的S／CO值超出2．2試劑組成包被板12孔X8條，直接使用，板條量按需進(jìn)行檢測(cè)32±3s范圍時(shí)定為失控，則參照免疫科室內(nèi)質(zhì)控失控處理的人數(shù)進(jìn)行調(diào)整；陽(yáng)性對(duì)照血清、陰性對(duì)照血清各160l程序進(jìn)行失控原因的排查。／瓶，稀釋液100ml／瓶，TMB底物、終止液各30ml／瓶，5-3檢測(cè)完成后使用前須使液體的溫度恢復(fù)到室溫水平，完全搖勻后保存在ELISA項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控記錄表上進(jìn)行記錄；參照于2～8℃；酶結(jié)合物70

5、ml／瓶，使用前根據(jù)標(biāo)本量取出Levey—jennings質(zhì)控圖控制，若有失控，則應(yīng)撰寫報(bào)告，找適量，將酶原液按1：200配制成應(yīng)用酶結(jié)合物，使用后保到失控原因進(jìn)行處理。存于2—8℃；濃縮洗滌液120ml／瓶，用前以新鮮蒸餾水5．4質(zhì)控品于2～8~0保存或去離子水稀釋25倍后備用，若有結(jié)晶，應(yīng)置室溫溶解后開(kāi)封后需在1周內(nèi)用完。使用前需置室溫20min，并充再稀釋備用。分振蕩、搖勻。2．3質(zhì)控品6注意事項(xiàng)為試劑盒提供的陰陽(yáng)對(duì)照。用前試劑盒各組分應(yīng)在室溫中平衡后再開(kāi)封啟用。3儀器每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照孑L的吸光度與空白對(duì)照孔的吸光度的差值LD5—10B型離心機(jī)；2510變頻振蕩器

6、；恒溫水浴箱；必須≥0．500。空白對(duì)照孔的吸光度應(yīng)≤0．100。EGATE一2310洗板機(jī)；MK3酶標(biāo)儀。陽(yáng)性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的平均吸光度差值(Rcx—4操作步驟NRCX)應(yīng)≥0．400，提示檢測(cè)結(jié)果可靠。否則應(yīng)懷疑技術(shù)問(wèn)題，檢測(cè)必須重新進(jìn)行。4．1加樣品稀釋液除空白孔外，各孔分別加入200l樣品稀釋液。如果RCX—NRCX值持續(xù)偏低，應(yīng)懷疑試劑變質(zhì)。4．2加樣7方法的局限性設(shè)空白1孔，陰、陽(yáng)性對(duì)照各2孔。除空白孔外，分別如標(biāo)本經(jīng)實(shí)驗(yàn)室重復(fù)檢測(cè)仍經(jīng)呈陽(yáng)性，就可認(rèn)定樣本加人10l陰、陽(yáng)性對(duì)照物。樣品孔加入10l樣品。中有HEVIgM抗體，若檢測(cè)陰性結(jié)果表明樣本中沒(méi)

7、有HEV4．3孵育及洗滌IgM抗體，卻出現(xiàn)陰性結(jié)果，則不排除感染HEV的可能。37℃水浴孵育30min，用洗板機(jī)洗板。洗板機(jī)先吸去板此外，此種試劑盒也可能出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，這種結(jié)果的由孔內(nèi)液體，再以洗滌液注滿各孔，靜置lmin后吸干，如此試劑盒的靈敏度和特異性決定。反復(fù)洗滌4次。經(jīng)過(guò)臨床實(shí)驗(yàn)還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)風(fēng)濕因子和高滴度的IgG會(huì)世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘2014年第14卷第8期129影響HEVIgMELISA試劑盒的性能，用IgG去除法f如9臨床意義RFRR)需要稀釋樣品，有可能影響HEVIgMELISA試劑盒戊型肝炎主要在發(fā)展中國(guó)家流行。在普通人群中的病死的使用性能。率