南果梨葉片離體培養(yǎng)的高效再生體系.pdf

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1、一44一江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)2014年第42卷第3期孫?。瞎嫒~片離體培養(yǎng)的高效再生體系[J]．江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42(3)：4_4—46南果梨葉片離體培養(yǎng)的高效再生體系孫俊(遼寧省經(jīng)濟(jì)林研究所，遼寧大連116031)摘要：為探索一種南果梨葉片離體培養(yǎng)高效再生的方法，以南國梨離體培養(yǎng)試管苗葉片為材料，在MS基本培養(yǎng)基中添加6一BA、NAA、IAA進(jìn)行離體培養(yǎng)，系統(tǒng)地研究植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)濃度、苗齡、不同部位葉片、接種方向、溫度、pH值及光照強度對南國梨葉片離體培養(yǎng)再生的影響。結(jié)果表明，MS+5mg／L6一BA+0．2mg／LNAA+7g／L瓊脂+30g／L蔗糖為南國梨

2、葉片再生芽誘導(dǎo)的適宜培養(yǎng)基，誘導(dǎo)率最高，為46．1％；選擇25—35d苗齡葉片、近葉柄處遠(yuǎn)軸面向上葉片可獲得高再生頻率；南果梨葉片離體再生的適宜條件為：溫度(25±2)oC，pH值為5．8—6．4，高光照強度。關(guān)鍵詞：南果梨；葉片再生；離體培養(yǎng)；影響因素中圖分類號：$661．204．3文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1002—1302(2014)03—0044—03南果梨(Pyrusussuriens~Maxim．)屬于薔薇科(Rosaceae)將其放在無菌濾紙上，然后用解剖刀在葉片背面(遠(yuǎn)軸面)垂梨亞科(Pomaceae)梨屬(PyrusL．)植物?，是秋子梨(Pyrus

3、直中脈橫劃3刀，但不要完全切斷葉片的上表皮。葉片再生ussuriens~Maxim．)中優(yōu)良的地方品種之一。該品種果實芽誘導(dǎo)的基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，不同激素組合見表1，附色澤鮮艷、果肉細(xì)膩、爽口多汁，風(fēng)味香濃，深受人們歡迎，市加蔗糖30g／L，pH值5．8。培養(yǎng)溫度為(25±2)oC，每天光場發(fā)展前景十分廣闊。但南國梨果實成熟集中，不耐儲運，照8～10h，光照強度2500～3000lx。葉片接種后50d，調(diào)柜臺壽命短，限制了南國梨的發(fā)展。常規(guī)育種過程相對較慢，查葉片再生效率和再生芽數(shù)。難以解決此問題。隨著農(nóng)業(yè)生物技術(shù)的發(fā)展，通過基因工程技1．2．2試驗葉片的苗齡對

4、不定芽誘導(dǎo)的影響采用離體培術(shù)加快南國梨耐儲品種的培育將成為解決南國梨保鮮的一條養(yǎng)25、35、60、90、120d組培苗葉片進(jìn)行葉片苗齡對再生頻率新捷徑。而在轉(zhuǎn)基因研究中，成功的基因轉(zhuǎn)化首先依賴于高效的影響研究。選取上部1～3葉位幼嫩葉片，垂直主脈橫切2穩(wěn)定的再生系統(tǒng)。原生質(zhì)體培養(yǎng)與葉片培養(yǎng)是目前運用最廣刀，將葉塊近軸面向下接種于分化培養(yǎng)基上。泛的轉(zhuǎn)基因植株再生系統(tǒng)。葉圓盤法因能避免對原生質(zhì)體1．2．3葉片種方方向?qū)θ~片再生不定芽的影響設(shè)葉片遠(yuǎn)的繁瑣操作而成為基因轉(zhuǎn)移中最常用的方法。梨屬植物葉軸面和近軸面接觸培養(yǎng)基2種接種方法處理，接種于MS+片的再生已有報道，但未有

5、南果梨葉片離體培養(yǎng)再生體5mg／L6一BA+0．2mg／LNAA+7L瓊脂+30g／L蔗糖培系建立及其影響因素研究的報道。本研究以南果梨試管苗葉養(yǎng)基上，對比觀察不定芽的誘導(dǎo)情況。培養(yǎng)及調(diào)查方法同片為試材，建立高頻穩(wěn)定的葉片離體再生體系為目的，以MS“1．2．1”部分?；九囵B(yǎng)基添加6一BA、NAA、IAA進(jìn)行離體培養(yǎng)，系統(tǒng)地進(jìn)1．2．4葉片不同部位對葉片再生不定芽的影響取繼代培行植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)濃度、苗齡、不同部位葉片、接種方向、溫養(yǎng)35d的無菌苗葉片。在葉片的基部、中部和尖部垂直于中度、pH值及光照強度對南國梨葉片離體培養(yǎng)再生影響的研脈各切1刀，接種在篩選出的含適

6、宜激素的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)究。本試驗旨在研究葉片離體再生不定芽的影響因素，建立基(MS+5mg／L6一BA+0．2mg／LNAA+7g／L瓊脂+簡單、快速、高效的葉片離體再生體系，從而為進(jìn)一步利用基30g／L蔗糖)上，每瓶放3張葉片，重復(fù)8次。培養(yǎng)及調(diào)查方因工程技術(shù)對南國梨進(jìn)行遺傳改良提供理論依據(jù)。法同“1．2．1”部分。上述試驗均為每瓶接種9個葉塊(3張葉)，隨機區(qū)組試1材料與方法驗設(shè)計，每處理10瓶，重復(fù)3次。試驗再生培養(yǎng)基為MS+1．1材料5mg／L6一BA+0．2mg／LNAA+7g／L瓊脂+3Og／L蔗糖。材料為采自遼寧省鞍山市的大紅南果的一年生枝條，在1．3

7、結(jié)果調(diào)查與統(tǒng)計分析無菌條件下培育出的試管苗。在葉片接種30d后對不定芽的再生率和平均每個葉塊1．2方法的分化不定芽數(shù)進(jìn)行調(diào)查。結(jié)果用DPS統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差1．2．1不同激素組合對葉片再生不定芽誘導(dǎo)的影響取繼分析，百分率經(jīng)反正弦轉(zhuǎn)換。再生頻率=再生不定芽的葉塊代培養(yǎng)25～35d的試管苗頂部生長健壯、完全展開的幼葉，數(shù)／接種葉塊數(shù)×100％；葉塊平均再生芽數(shù)(個／葉塊)=葉塊再生不定芽總數(shù)／出芽葉塊數(shù)。收稿日期：2013—11—042結(jié)果與分析基金項目：遼寧省博士基金啟動項目(編號：20131051)。作者簡介：孫俊(1983一)，女，遼寧大連人，博士，工程師，主要