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《蓖麻蠶乙酰膽堿酯酶基因Pcrace2的克隆及序列與表達(dá)分析.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、2013，39(3)：0460—0466ISSN0257—4799：CN32—1115／SE—mail：CYKE@chinajourna1．net．cn蓖麻蠶乙酰膽堿酯酶基因Pcrace2的克隆及序列與表達(dá)分析劉娟張?jiān)氯A張華光高麗錢荷英孫平江徐安英’(江蘇科技大學(xué)，江蘇鎮(zhèn)江212003；中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所，江蘇鎮(zhèn)江212018)摘要昆蟲乙酰膽堿酯酶(acetyleholinesterase，AChE，EC3．1．1．7)是有機(jī)磷和氨基甲酸酯類殺蟲劑的作用靶標(biāo)。利用RT。PCR和RACE技術(shù)從蓖麻蠶(Philosamiacynthiaricini)幼蟲頭部組織克隆了乙
2、酰膽堿酯酶基因Pcrace2。該基因cDNA全長為2O5lbp，包含l497bp的ORF，編碼498個(gè)氨基酸，蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量為56．25kD，等電點(diǎn)(pI)為5．11，含有由23個(gè)氨基酸組成的前體信號(hào)肽，推測(cè)為分泌型蛋白質(zhì)?；赑crAChE2同源氨基酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化分析表明：蓖麻蠶與小菜蛾(Plutellaxylostella)、棉鈴蟲(Helicoverpaarm@era)、煙青蟲(ttelicoverpaassulta)的親緣關(guān)系最近，與家蠶(Bombyxmori)和野桑蠶(Bombyxmandarina)的親緣關(guān)系也比較近。利用Rea1．timePCR方法分析P
3、crace2基因在蓖麻蠶5齡第3天幼蟲的頭部、脂肪體、絲腺、中腸和血液中均有表達(dá)，以頭部的表達(dá)量最高；在蓖麻蠶不同發(fā)育時(shí)期，Pcrace2在蛾期的表達(dá)量明顯高于其它發(fā)育時(shí)期，在5齡幼蟲期的表達(dá)量最低。研究結(jié)果有助于進(jìn)一步分析蓖麻蠶乙酰膽堿酯酶基因的功能。關(guān)鍵詞蓖麻蠶；乙酰膽堿酯酶；基因克隆；序列特征；表達(dá)譜；實(shí)時(shí)定量PCR中圖分類號(hào)$885．2；Q78文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0257—4799(2013)03—0460—07MolecularCloning，SequenceFeatureandExpressionPatternofAcetylcholinesteraseGen
4、efrOmPhilosamiacynthiariciniLIUJuan，ZHANGYue．Hua’，ZHANGHua．Guang’GAOLi’QIANHe—YingSUNPing—JiangXUAn—Ying，(JiangsuUniversityofScienceandTechnology，ZhenjiangJiangsu212003，China；TheSericulturalResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，ZhenjiangJiangsu212018，China)AbstractInsecta
5、cetyIchoIinesterase(AChE，EC3．11．7)isthetargetof0rgan0phosphorusandcarbamateinsecti—cidesAneri—silkwormfPhilosamiacynth『a，『c／nf)acetylcho1inesterasegenePcrace2wasclonedfrOmheadtissueoferi—silkwormlarvabymeansofRT—PCRandRACEFull—lengthcDNAofthisgeneis2051bplongwithanORFof1497bDthatencodes49
6、8aminoacids．Theencodedproteinispredictedtohaveamolecularweightof56．25kDandPlof511．Theproteinhasasignalpeptideprecursorof23aminoacidsandispredictedtobeasecretoryproteinPhylogenetica—nalysisbasedonhomologousaminoacidsequencesshowedthatPhilosamiacynth
7、aric／nisharedtheclosestgeneticre—lations
8、hipwithPIute／／axylostela．Helicoverpaam1igeraandHelicoverpaassulta．＼talsohadclosegeneticrelationshipwithBombyxmoriandBombyxmandarina．Real-timePCRanalysisshowedthatPcrace2genewasexpressedinhead，fatbody，silkgland，midgutandhemolymphofday3eri—silkwormlarvaeofthe5thinstar
