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《蓖麻蠶ago1蛋白基因的克隆及序列與表達特征》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、ScienceofSericulture蠶業(yè)科學2014，40(5):0824－0829ISSN0257－4799;CN32－1115/SE-mail:CYKE@chinajournal．net．cn蓖麻蠶AGO1蛋白基因的克隆及序列與表達特征11，21，211，21，21，2何慶玲張月華錢荷英羅旭芳李剛孫平江徐安英12(江蘇科技大學，江蘇鎮(zhèn)江212003;中國農(nóng)業(yè)科學院蠶業(yè)研究所，江蘇鎮(zhèn)江212018)摘要?。襈A介導的基因表達沉默機制在昆蟲中非常保守。作為ＲNA誘導沉默復合體(ＲISC)的關(guān)鍵組分，Argonaute(AGO)蛋白家族成員在ＲNA干擾途徑中起著關(guān)鍵性作用。以蓖麻蠶(Ph
2、ilosamiacynthiaricini)品種海藍的幼蟲頭部cDNA為模板，利用ＲT-PCＲ和ＲACE技術(shù)克隆了一個編碼AGO蛋白的基因，將該基因命名為pcr-AGO1(GenBank登錄號:KJ676101)。該基因cDNA全長3490bp，包括182bp的5'-UTＲ和572bp的3'-UTＲ，OＲF為2736bp，編碼911個氨基酸，蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為101.4923kD，等電點為9.31，蛋白質(zhì)序列中含有AGO家族成員典型的PAZ結(jié)構(gòu)域和PIWI結(jié)構(gòu)域。實時熒光定量PCＲ檢測pcr-AGO1基因在蓖麻蠶的幼蟲期、蛹期、蛾期和卵期以及幼蟲的頭部、脂肪體、表皮、絲腺、中腸和血液等組織器
3、官中均有表達。其中，在卵期的表達量最高，幼蟲期最低，并且在除蟻蠶外的整個幼蟲期的表達量沒有太大變化;在幼蟲各個組織中的表達量以表皮最高，中腸次之，在血液和頭部的表達量都較低。研究結(jié)果提示，該基因可能在蓖麻蠶的整個發(fā)育期都發(fā)揮相應的功能，并可能參與幼蟲表皮細胞的生長調(diào)控。關(guān)鍵詞蓖麻蠶;AGO家族蛋白;基因克隆;序列特征;表達譜;實時熒光定量PCＲ中圖分類號S885.2;Q786文獻標識碼A文章編號0257－4799(2014)05－0824－06DOI:10.13441/j.cnki.cykx.2014.05.010Cloning，SequenceFeatureandExpressionPa
4、tternofArgonauteGene1fromPhi-losamiacynthiaricini11，21，211，21，2HEQing-LingZHANGYue-HuaQIANHe-YingLUOXu-FangLIGangSUNPing-Jiang1，2*XUAn-Ying12(JiangsuUniversityofScienceandTechnology，ZhenjiangJiangsu212003，China;TheSericulturalＲesearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，ZhenjiangJiangsu2
5、12018，China)AbstractSilencingofgeneexpressionmediatedbysmallＲNAisaconservedmechanismininsects．Asthecorecom-ponentofＲNA-inducedsilencingcomplex(ＲISC)，theArgonaute(AGO)familyproteinsplayacrucialroleinＲNAinter-ference(ＲNAi)pathway．Aneri-silkworm(Philosamiacynthiaricini)Argonautefamilygenewasclonedusi
6、ngcDNAfromlarvalheadoferi-silkwormvarietyHailanastemplatebymeansofＲT-PCＲandＲACE，andwasnamedpcr-AGO1(Gen-BankaccessionNo．KJ676101)．FulllengthcDNAofthisgenewas3490bp，including182bp5'-UTＲand572bp3'-UTＲ．ItsOＲFwas2736bpandencodedaproteinof911aminoacidswithmolecularweightof101.4923kDandisoe-lectricpoint
7、of9.31．ThededucedproteincontainedtwotypicalconserveddomainsoftheAGOfamily，i．e．PAZandPIWIdomains．FluorescentquantitativePCＲrevealedthatpcr-AGO1genewasexpressedinvariousdevelopmentalsta-gesoferi-silkwormincludingla
