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《聚乳酸聚乙醇酸微球冷凍切片方法的研究.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、廣東藥學(xué)院學(xué)報JournalofGuangdongPharmaceuticalUniversityFeb．2014．30(1)聚乳酸聚乙醇酸微球冷凍切片方法的研究黎吶，麥海燕，羅宇燕，鐘晨，張永明(1．中山大學(xué)藥學(xué)院，廣東廣州510006；2．中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院，廣東廣州510630)摘要：目的研究聚乳酸聚乙醇酸(PLGA)微球切片的制備方法，以便使用掃描電鏡獲得孔洞結(jié)構(gòu)完整清晰的微球截面圖片，為后期使用圖像處理軟件計算微球的孔隙率提供基礎(chǔ)。方法使用冷凍包埋劑包埋載有牛血清白蛋白(BSA)的PLGA微球，冷凍切片獲得微球截面，并用掃描電子顯微鏡觀
2、察切片形態(tài)，分別考察包埋劑的種類、浸泡時間、液氮冷凍等對切片質(zhì)量的影響。結(jié)果優(yōu)化方法為：將微球浸泡在自制的質(zhì)量濃度10％明膠+5％甘油混合冷凍包埋劑中，于37cc浸泡3h，然后轉(zhuǎn)移至質(zhì)量濃度20％明膠+5％甘油混合冷凍包埋劑中，于37℃浸泡1h，再轉(zhuǎn)移至一20℃的冰箱中使包埋劑凝固；切片前將包埋塊浸入液氮中急速冷凍5min。結(jié)論使用優(yōu)化方法所得的PLGA微球切片，截面孔}同結(jié)構(gòu)完整清晰，且操作方法簡單、快速和有效。關(guān)鍵詞：聚乳酸聚乙醇酸：微球；微觀結(jié)構(gòu)；冷凍切片技術(shù)中圖分類號：R944文獻標(biāo)志碼：Adoi：10．3969／j．issn．1006—8
3、783．2014．01．001文章編號：1006—8783(2014)01．001．05Studyoncryo-sectioningtechniqueofpoly(1actic-CO-glycolicacid)microspheresIJlNa，MAIHaiyan，LUOYuyan，ZHONGChen，ZHANGYongming(1．SchoolofPharmaceuticalSciences，SunYat—senUniversity，Guangzhou510006，China；2．TheThirdAfiliatedHospitalofSunYat
4、—senUniversity，Guangzhou510630，China)Abstract：0bjectiveTodevelopanexperimentalmethodtoobtaincompletecryo—sections，whichshowthestructureofpoly(1actic—CO—glycolicacid)(PLGA)microspheresclearlywiththeinternalporesretainingtheirshape．MethodsThemicrospheresweresuspendedintwodiffere
5、ntembeddingagents，OCT(optimalcuttingtemperature)compoundandanaquasolutioncontaininggelatinandglycerin，andthefixedsampleswereembedded，frozeninliquidnitrogenandcryo—sectioned．Thenthesectionsweredriedandphotographedbyscanningelectronmicroscopy．Thetechnicalparametersofcryo—section
6、ingsuchasthetypeofembeddingagents，theimmersiontimeandtheprocedureofquickfreezingbeforecryo—sectioningwereinvestigated，andtheoptimizedmethodwasestablished．ResultsTheoptimizedcryo-sectioningmethodwasasfollows：microspheresweresoakedinanaqueoussolutioncontaining10％gelatin-5％glycer
7、infor3hat37oC．thensoakedin20％gelatin一5％glycerinfor1hat37oC，aftersolidificationbystoredin一20℃，themicrospherescontaininggelatin—glycerinjellywerefrozeninliquidnitrogenfor5minandcryo—sectioned．ConclusionsTheporousstructurewithoutdistortionofthesectionscouldbeclearlyobservedbyscan
8、ningelectronmicroscopy．Theoptimizedmethodwaseasy，fastandeffec
