雷公藤甲素誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞凋亡作用.pdf

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1、中國藥理學(xué)通報(bào)ChinesePharmacologicalBulletin2014Aug；30(8)：1147—50·1147·網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2014-7—1016：51網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：／／www．enki．net／kems／doi／10．3969／j．issn．1001—1978．2014．08．022．html雷公藤甲素誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞凋亡作用王秀，張競競，張配，孫小錦，劉哲，張鑫宇，劉浩(1．蚌埠醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，安徽省生化藥物工程技術(shù)研究中心，安徽蚌埠233030；2．蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，安徽蚌埠233003)doi：10

2、．3969／j．issn．1001—1978．2014．O8．022類風(fēng)濕作用，還具有較強(qiáng)的抗腫瘤作用。研究發(fā)現(xiàn)，文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1001—1978(2014)08—1147—04其對某些腫瘤細(xì)胞的殺傷毒性甚至高于紫杉醇和阿中國圖書分類號：R284．1；tt．329．25；R739．630．22霉素I3。但在鼻咽癌中的研究較少，本文擬將雷摘要：目的探討雷公藤甲素誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞凋亡的作用及公藤甲素作用于鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞株，觀察其抗機(jī)制。方法MTI'測定雷公藤甲素對CNE．2Z細(xì)胞的抑制鼻咽癌的作用，并探討作用的機(jī)制。作用；碘化丙啶(

3、propidiumiodide，PI)染色測定雷公藤甲素1材料與方法．對鼻咽癌細(xì)胞凋亡的影響；Westernblot測定葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucoseregulatedprotein78，GRP-78)、Akt的表達(dá)及Akt1．1試劑雷公藤甲素(天津美倫醫(yī)藥集團(tuán))；的磷酸化水平；ROS熒光探針一二氫乙啶測定細(xì)胞內(nèi)活性氧CNE．2Z細(xì)胞株，蚌埠醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系生化藥理實(shí)驗(yàn)中(reactiveoxygenspecies，ROS)的水平。結(jié)果M33"顯示，雷心提供；RPMI1640培養(yǎng)基(Gibco公司)；兔抗人公藤甲素對鼻咽癌細(xì)胞CNE-2Z的抑制

4、作用隨濃度增加及GRP78、Akt、pAkt抗體、鼠抗人p．a(chǎn)ctin抗體購自時(shí)間延長而增強(qiáng)；PI結(jié)果顯示，雷公藤甲素能明顯誘導(dǎo)鼻咽SantaCruz公司；山羊抗鼠IgG、山羊抗兔IgG購自癌細(xì)胞的凋亡，25、50和100nmol·L的雷公藤甲素作用細(xì)北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；ROS熒光探針一胞24h，CNE一2Z細(xì)胞的凋亡率分別為14．0％、26．9％和DHE(威格拉斯生物技術(shù)有限公司)。34．4％；Westernblot顯示，雷公藤甲素對CNE．2Z細(xì)胞GRP一1．2方法78表達(dá)無明顯影響，但可減弱Akt的表達(dá)及磷酸化水平；氧1．2．1

5、藥液配制雷公藤甲素用二甲基亞砜(DM—化應(yīng)激實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，雷公藤甲素作用4h后，能增加鼻咽癌細(xì)胞CNE-2Z內(nèi)ROS的水平。結(jié)論雷公藤甲素具有抑so)配成5．5mmol·L貯液，一20~C保存。臨用前制鼻咽癌細(xì)胞CNE-2Z增殖的作用，且具有濃度與時(shí)間依賴以RPMI1640培養(yǎng)基稀釋成62．5、125、250、500、1性。其機(jī)制可能是雷公藤甲素通過誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，抑制細(xì)胞000、2000及4000nmol·L。。。內(nèi)Akt的表達(dá)及其磷酸化，調(diào)節(jié)下游的信號通路，進(jìn)而促進(jìn)1．2．2細(xì)胞培養(yǎng)CNE一2Z細(xì)胞接種于含10％新CNE-2Z細(xì)胞的凋亡。生小

6、牛血清、青霉素(1×10U·L)、鏈霉素(100mg·L)和NaHCO3(33．7mg·L)的RPMI1640關(guān)鍵詞：雷公藤甲素；鼻咽癌細(xì)胞；CNE-2Z；氧化應(yīng)激；活性培養(yǎng)液中，體積分?jǐn)?shù)0．05CO、飽和濕度、37c【=培養(yǎng)氧；凋亡箱中培養(yǎng)，每2～3天傳代1次。1．2．3MTF測定細(xì)胞的增殖活性細(xì)胞接種于雷公藤甲素(triptolide，TPL)又稱雷公藤內(nèi)酯、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，5×10個(gè)每孔。培養(yǎng)24h，吸雷公藤內(nèi)酯醇，是從衛(wèi)矛科雷公藤屬植物中分離的棄培養(yǎng)液，加新鮮含10％血清培養(yǎng)液180Izl，對照一種環(huán)氧二帖類內(nèi)酯化合物，是治療類風(fēng)濕

7、病雷公組加入含0．01％DMSO的培養(yǎng)液20txl；藥物處理組藤片和雷公藤多苷片等制劑的主要有效成分。加入不同濃度的雷公藤甲素溶液各2Ol，使終濃度現(xiàn)代研究表明，雷公藤甲素不僅具有高效的抗炎、抗分別為6．25、12．5、25、50、100、200及400nmol·收稿日期：2014～04—15，修回稿日期：2014—05—12L。。，其中DMSO含量不超過0．01％；同時(shí)設(shè)立調(diào)零基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No81000992)；蚌埠醫(yī)學(xué)院組(無細(xì)胞組)，加入200tzl培養(yǎng)液。培養(yǎng)12、24、科研項(xiàng)目(byky1346)48h后加入2

8、0txlMTT(以PBS配成5g·L)，37作者簡介：王秀(1983一)，女，碩士，講師，研究方向：生化藥理學(xué)qC繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清，每孔加入150