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1、·586·現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志ModernJournalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine2007Feb,16(5)雷公藤甲素誘導(dǎo)H22細(xì)胞凋亡作用研究居星耀(浙江省湖州市婦幼保健院,浙江湖州313000)[摘要]目的 研究雷公藤甲素對(duì)H22細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用。方法 MTT法測(cè)定雷公藤甲素對(duì)H22腫瘤細(xì)胞的抑制率,并通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀測(cè)及DNA凝膠電泳分析檢測(cè)雷公藤甲素對(duì)H22細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用。結(jié)果 雷公藤甲素80μg/L抑制率達(dá)41.6%,與濃度成正相關(guān),IC50為85.79μg/L;電鏡結(jié)果表明,40μg/L以上
2、濃度可明顯誘導(dǎo)H22細(xì)胞出現(xiàn)凋亡特征;DNA電泳顯示明顯的梯狀條帶。結(jié)論 雷公藤甲素能誘導(dǎo)H22細(xì)胞凋亡,表明其具有一定的抗肝癌作用。[關(guān)鍵詞]雷公藤甲素;抗腫瘤;凋亡[中圖分類號(hào)]R917[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1008-8849(2007)05-0586-03StudyofinducingH22cellapoptosisactionoftriptolideJUXing2yao(HuzhouMaternalandChildHealthHospital,Huzhou313000,Zhejiang,China)Abstract:ObjectiveItistostudythe
3、inducingH22cellapoptosisactionoftriptolide.MethodsTheinhibitionratiooftriptolideonH22tumorcellwasdeterminedwithMTTmethod.TheinducingH22cellapoptosisactionoftriptolidewasob2servedanddetectedwithcellmorphologyandDNAgelelectrophoresisanalysis.ResultsTheinhibitionratioof80μg/Ltrip2tolidewas41.6
4、%.ItwaspositivelycorrelatedwithconcentrationandtheIC50was85.79μg/L.Theelectronmicroscoperesultmanifestedthattheconcentrationoftriptolidemorethan40μg/LcouldobviouslyinducedH22cellshowingapoptosischaracteristics.DNAelectrophoresisshowedobviousladdershapestrap.ConclusionTriptolidecaninduceH22c
5、ellapoptosis,itshowsthattriptolidehascertainantihepatocarcinomaeffect.Keywords:triptolide;anti2tumor;apoptosis 雷公藤甲素(triptolide,TRI)為雷公藤中主要的活性物液繼續(xù)培養(yǎng)48h,MTT法于570nm處檢測(cè)各孔吸光度值[1]質(zhì),其體內(nèi)化學(xué)性質(zhì)較穩(wěn)定并具有較強(qiáng)生物活性。眾多研A對(duì)照組-ATRI組(A),計(jì)算細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率/%=×A對(duì)照組究表明,雷公藤甲素具有很好的抗排異、抗炎、抗生育及抗腫[1-3]100%瘤等作用。誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是抗癌藥物的作
6、用機(jī)制之11214 細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo) 收集上述指數(shù)生長(zhǎng)期的H22細(xì)一,筆者現(xiàn)對(duì)雷公藤甲素誘導(dǎo)H22凋亡作用探討如下。6胞,計(jì)數(shù)(細(xì)胞終濃度2×10個(gè)/mL)、設(shè)組(TRI藥物處理分1實(shí)驗(yàn)資料設(shè)5個(gè)濃度組分別記為a、b、c、d、e:10,20,40,60,80μg/L和111材料及主要相關(guān)儀器 雷公藤甲素(深圳市牌牌科技有對(duì)照組),接種于100mL培養(yǎng)瓶中。培養(yǎng)24h后收集細(xì)胞,限公司);MTT(Thiazolylblue)噻唑蘭(美國(guó)Amresco0793超進(jìn)行細(xì)胞凋亡的觀察。純);酶標(biāo)儀(EHSYLABL222568);透射電鏡(日本JEOL公司JEM-200CX);H22小
7、鼠肝癌細(xì)胞株(由浙江中醫(yī)藥大學(xué)1121411 電鏡細(xì)胞形態(tài)觀察 處理24h后收集細(xì)胞,棄去分子研究所提供);細(xì)胞培養(yǎng)試劑為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)上清液,用D-Hanks液沖洗瓶壁3次,用滴管輕輕112 方法地吹打瓶壁,使瓶壁上細(xì)胞全部脫落,然后,將其移至離心管,11211 細(xì)胞培養(yǎng) 將H22細(xì)胞培養(yǎng)于含10%小牛血清、1001000r/min離心棄去上清液,加2.5%戊二醛5mL,輕輕地吹IU/mL青霉素和100IU/mL鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)液打使細(xì)胞分散,0～4℃靜置30min后,
