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《酶聯(lián)免疫在食品檢測(cè)中的應(yīng)用.ppt》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在PPT專區(qū)-天天文庫(kù)。
1、1971年瑞典學(xué)者Engvail和Perlmann,荷蘭學(xué)者VanWeerman和Schuurs分別報(bào)道將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測(cè)體液中微量物質(zhì)的固相免疫測(cè)定方法，即:酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(Enzyme-linkedImmunosorbentAssay,ELISA)。ELISA現(xiàn)在已成為目前分析化學(xué)領(lǐng)域中的前沿課題，它將酶促反應(yīng)的高效率和免疫反應(yīng)的高度專一性有機(jī)地結(jié)合起來(lái)，可對(duì)各種微量有機(jī)物含量進(jìn)行測(cè)定。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)用酶標(biāo)記抗原或抗體檢測(cè)未知抗體或抗原的方法。1.定
2、義2.分類間接法（IndirectELISA）：將已知抗原吸附于固相載體，酶標(biāo)記二抗檢測(cè)液相中未知抗體雙抗體夾心法（SandwichELISA)：將已知抗體吸附于固相載體，酶標(biāo)記一抗檢測(cè)液相中的可溶性抗原競(jìng)爭(zhēng)法（CompetitiveELISA)：將已知抗體或抗原吸附于固相載體，酶標(biāo)記抗原或抗體檢測(cè)液相中的可溶性抗原或抗體3.原理（以雙抗體夾心法為例）：顯色抗體待測(cè)抗原酶標(biāo)抗體EEELISA基本原理（1）利用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物與酶建立關(guān)聯(lián)。（2）通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測(cè)定。ELISA測(cè)定中酶的作用由于酶的催化效率很高
3、，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定具有極高的靈敏度。ELISA技術(shù)在食品分析中的應(yīng)用近年來(lái)，ELISA因其操作程序的規(guī)范化、簡(jiǎn)單化和檢測(cè)的高靈敏性，在農(nóng)藥殘留、動(dòng)物違禁藥物殘留、有害細(xì)菌、有機(jī)物污染、生物毒素、食品添加劑和人畜共患疾病病原體的快速檢測(cè)和分析等食品安全性檢測(cè)領(lǐng)域正逐步推廣應(yīng)用。毒素檢測(cè)真菌毒素是真菌產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，有十幾種對(duì)人類危害較大，它們具有毒性強(qiáng)和污染頻率高的特點(diǎn)。目前利用合成單克隆抗體的方式，幾乎所有重要真菌毒素如伏馬毒素、赭曲毒素、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯酮、展青霉素、黃曲霉毒素（AFT）等的ELISA
4、檢測(cè)方法均已建立。另外該方法也正在被廣泛地應(yīng)用于各種藻類和貝類毒素的檢測(cè)。細(xì)菌污染檢測(cè)目前利用ELSIA檢測(cè)食品中的有害細(xì)菌數(shù)量有許多種途徑，其中通過(guò)制備單克隆抗體分析食品中細(xì)菌的酶聯(lián)免疫測(cè)定技術(shù)研究最多，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。ELISA法可用于檢測(cè)食品中沙門(mén)氏菌、軍團(tuán)菌、大腸桿菌、李斯特菌及金黃色葡萄球菌等致病微生物。另外，ELISA在寄生蟲(chóng)的檢測(cè)中也有應(yīng)用，如：豬弓形蟲(chóng)。農(nóng)藥殘留檢測(cè)酶聯(lián)免疫測(cè)定已成為許多國(guó)際權(quán)威分析機(jī)構(gòu)如AOAC分析農(nóng)藥殘留的首選方法。迄今為止，應(yīng)用酶聯(lián)免疫測(cè)定檢測(cè)食品中的殘留農(nóng)藥主要為除草劑、殺蟲(chóng)劑和殺菌劑。例如草甘膦
5、的ELISA檢出下限為0.07μg/mL，與色譜法測(cè)定的結(jié)果一致。肉類品質(zhì)檢測(cè)ELISA在肉類食品品質(zhì)檢測(cè)中的應(yīng)用主要包括加熱終溫判定分析和摻入異種肉的檢測(cè)兩個(gè)方面。利用蛋白質(zhì)制備抗體，可以指示蛋白質(zhì)在加熱過(guò)程中變化，在商業(yè)上作為快速判定分析肉品終溫的一種ELISA方法。對(duì)摻入異種肉的檢測(cè)，則利用單克隆抗體的酶聯(lián)免疫測(cè)定法。目前在商業(yè)上，酶聯(lián)免疫測(cè)定已可以檢測(cè)十多種動(dòng)物肉。動(dòng)物食品違禁藥物殘留檢測(cè)目前幾乎所有違禁藥物均已建立了ELISA檢測(cè)方法，如：β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、氯霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類、磺胺類和氟喹諾酮類等，尤其是鹽酸
6、克倫特羅、萊克多巴胺和呋喃唑酮代謝物（AOZ）等違禁藥物。例如瘦肉精（鹽酸克倫特羅）酶聯(lián)免疫檢測(cè)法，基于抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性抑制測(cè)定，不僅可作為一個(gè)定性篩選過(guò)程，也可以進(jìn)一步進(jìn)行定量測(cè)定。另外，寵物食品及含油食品中氟喹諾酮類藥物如諾氟沙星、環(huán)丙沙星等殘留也可以利用該方法檢出，且滿足歐盟及日本美國(guó)等地區(qū)和國(guó)家對(duì)該類藥物篩選檢測(cè)的要求。轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)ELISA法可以檢測(cè)某些特定的轉(zhuǎn)基因表達(dá)蛋白，以分析食品是否來(lái)自轉(zhuǎn)基因生物或含有轉(zhuǎn)基因成分。美國(guó)食品藥品管理局（FDA）已研究出用雙夾心ELISA法檢測(cè)食品中是否含有轉(zhuǎn)基因玉米成分。Strate
7、jicDignostics公司已開(kāi)發(fā)利用ELISA原理的試劑盒用于檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆。病原體檢測(cè)目前在禽流感病毒檢測(cè)方面，我國(guó)已完成并建立了禽流感免疫酶診斷方法和技術(shù)，已形成試劑盒生產(chǎn)能力。另外，采用ELISA法還可以有效檢測(cè)牛及羊朊病毒蛋白，該蛋白可引起牛的病理性海綿狀病毒，是一種致死性神經(jīng)系統(tǒng)疾?。ǒ偱２?，BSE），與人群發(fā)生變異型克雅氏?。╒CJD）有關(guān)。環(huán)境污染物的檢測(cè)ELISA亦可用于檢測(cè)環(huán)境污染物，如：重金屬、二噁英和甾體激素等的檢測(cè)。利用能與Hg、Cd、Pb、ZnCu、Ag等重金屬離子結(jié)合的金屬硫蛋白，設(shè)計(jì)的ELISA檢測(cè)方法可
8、以高效靈敏地檢出食品中含有的以上幾種重金屬。其他成分的檢測(cè)（1）食品中營(yíng)養(yǎng)素的測(cè)定如:a檢測(cè)嬰幼兒配方食品中谷蛋白含量b檢測(cè)保健食品中透明質(zhì)酸的含量c牛初乳中乳鐵蛋白含量（2）抗?fàn)I養(yǎng)素因子的檢
