志賀氏菌檢驗(yàn).ppt

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1、志賀氏菌的檢驗(yàn)一、流行病學(xué)簡介一種古老的腸道傳染性腹瀉。19世紀(jì)曾出現(xiàn)全世界菌痢的大流行。1899年，日本人志賀氏首先發(fā)現(xiàn)菌痢是由痢疾桿菌引起。第一次世界大戰(zhàn)期間（1914-1918年），德國死于痢疾者約4萬余人，并進(jìn)一步證實(shí)痢疾桿菌是菌痢流行的病原。細(xì)菌性痢疾歷年來一直是我國夏秋季發(fā)病率最高的腸道傳染病。近年來報(bào)道非洲及中美洲流行的痢疾志賀菌病死率達(dá)5%-15%。我國屬發(fā)展中國家，人民的生活條件雖然在不斷改善，但由于部分地區(qū)衛(wèi)生知識普及不夠，食品衛(wèi)生管理、監(jiān)督不力，使得志賀菌的感染在我國傳染病中

2、多年來一直處于較高的地位。每年均有志賀菌感染暴發(fā)的報(bào)告，每次暴發(fā)的發(fā)病人數(shù)在數(shù)十人到上千人不等。多數(shù)由于食物和飲水污染引起。1994年5月11日，江蘇省無錫市發(fā)生一起26所小學(xué)的學(xué)生因課間餐食用豆奶導(dǎo)致1345人食物中毒的事故，后經(jīng)調(diào)查是一起志賀菌和致病性大腸桿菌混合感染引起的食物中毒，此次爆發(fā)波及范圍之大，發(fā)病人數(shù)之多，在我國歷史上頗為少見。志賀菌致病力強(qiáng)，少量細(xì)菌進(jìn)入人體即可引起發(fā)病。是否發(fā)病，取決于細(xì)菌數(shù)量、致病力（粘附、侵襲力、毒素）和人體的抵抗力。各種志賀菌都可以產(chǎn)生強(qiáng)烈的內(nèi)毒素，是引起

3、全身毒血癥的主要因素。志賀菌還可產(chǎn)生外毒素（志賀毒素），具有神經(jīng)毒、細(xì)胞毒和腸毒性作用，能引起更嚴(yán)重的臨床表現(xiàn)如溶血性尿毒綜合癥等。二、生物學(xué)特性（一）、形態(tài)與染色革蘭氏陰性短桿菌、無莢膜，無芽胞，無鞭毛2~3um*0.5~0.7um（二）、培養(yǎng)特性1、需氧或兼氧性厭氧，最適溫度37℃，PH7.2~7.42、在普通瓊脂和SS平板上，能形成圓形、微凸、光滑濕潤、無色半透明、邊緣整齊、在中等大小的菌落3、宋氏志賀氏菌菌落較大，較不透明，粗糙而扁平，在SS平板上可遲發(fā)酵乳糖，菌落呈玫瑰紅色。4、在肉湯中

4、呈均勻混濁生長，無菌膜。（三）、生化反應(yīng)1、發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，除宋氏志賀氏菌外，均不發(fā)酵乳糖。2、不發(fā)酵側(cè)金盞花醇、肌醇、水楊苷。3、不產(chǎn)生H2S，不分解尿素，V-P試驗(yàn)陰性，不能利用檸檬酸鹽。4、甲基紅陽性。（四）、抗原結(jié)構(gòu)1、抗原構(gòu)成：O抗原：群特異性抗原：A、B、C、DK抗原：除B群外，一般有K抗原2、志賀氏菌的分群與血清型志賀氏菌分為四群：A群（痢疾志賀氏菌）：1~10型B群（福氏志賀氏菌）：1~6型+X、Y兩個(gè)變種，C群（鮑氏志賀氏菌）：1~15型D群（宋內(nèi)氏志賀氏菌）：1個(gè)型三、

5、志賀氏菌檢驗(yàn)GB4789.5-20121.以原國標(biāo)為基礎(chǔ)，保持與原標(biāo)準(zhǔn)的連續(xù)性考慮基層單位方法的可操作性，對增菌步驟、培養(yǎng)條件盡可能簡化；生化反應(yīng)方面亦盡量沿用原標(biāo)準(zhǔn)中的方法2.與國際接軌的原則該標(biāo)準(zhǔn)的起草內(nèi)容主要參考了國際標(biāo)準(zhǔn)組織ISO標(biāo)準(zhǔn)，部分參考采用了美國FDA、NMKL等標(biāo)準(zhǔn)3.與現(xiàn)有已頒布的新版國家標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)統(tǒng)一參考了已頒布的2008版國標(biāo)，在樣品的前處理步驟，培養(yǎng)條件的選擇，文字描述等方面盡量保持一致。GB/T4789.5-2003標(biāo)準(zhǔn)不足處1.采用GN增菌肉湯,37℃需氧培養(yǎng),4小時(shí)后

6、大腸菌的生長速度大大超過志賀氏菌,檢測效果較差2.使用的分離平板SS對志賀1型有抑制3.檢驗(yàn)方法與現(xiàn)行的其它國家的標(biāo)準(zhǔn)存在差異增菌：用GN增菌液使處于瀕死狀態(tài)的細(xì)菌恢復(fù)活力選擇性平板分離培養(yǎng)：XLD+MAC/顯色培養(yǎng)基生化試驗(yàn)：可采用API20E或VITEK2血清學(xué)鑒定：特異性診斷血清鑒定到種。志賀氏菌操作流程修改的內(nèi)容增菌部分志賀氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL）原國標(biāo)：GNISO：志賀氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL）FDA：志賀氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL和3μg/mL）NM

7、KL：志賀氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL）培養(yǎng)條件：41.5℃±1℃厭氧培養(yǎng)原國標(biāo)：37℃需氧培養(yǎng)ISO：41.5℃厭氧培養(yǎng)FDA：42℃（除宋內(nèi)其他志賀菌)和44℃（宋內(nèi)）厭氧培養(yǎng)NMKL：42℃厭氧培養(yǎng)分離用平板原國標(biāo)：HE或SS;MAC或EMBISO：MAC、XLD、HEFDA：MACNMKL：MAC、XLD、HE（一）增菌培養(yǎng)用志賀氏菌增菌液增菌,41.5℃±１℃，16h～20h厭氧培養(yǎng)。智能厭氧微需氧培養(yǎng)系統(tǒng)（二）分離培養(yǎng)取增菌后的GN增菌液或志賀氏增菌肉湯分別劃線接種于XLD瓊脂

8、平板和MAC瓊脂平板或R&F志賀氏菌顯色培養(yǎng)基平板上于36℃?1℃培養(yǎng)20h～24h，觀察各個(gè)平板上生長的菌落形態(tài)若出現(xiàn)的菌落不典型或菌落較小不易觀察，則繼續(xù)培養(yǎng)至48h再進(jìn)行觀察。菌落特征MAC瓊脂：無色至淺粉紅色，半透明、光滑、濕潤、圓形、邊緣整齊或不齊，直徑2～3mmXLD瓊脂：粉紅色至無色，半透明、光滑、濕潤、圓形、邊緣整齊或不齊，直徑1～2mmR&F志賀氏菌顯色瓊脂：白色，不透明、圓形、邊緣不整齊，直徑1mm～3mm，菌落周圍瓊脂顏色變?yōu)樽霞t色志顯1宋內(nèi)氏典型菌落XLD2