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1、志賀氏菌的檢驗(yàn)一、生物學(xué)特性（一）形態(tài)與染色革蘭氏陰性短桿菌、無(wú)莢膜，無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛，有菌毛2~3um*0.5~0.7um（二）培養(yǎng)特性1、需氧或兼氧性厭氧，最適溫度37℃，PH6。4~7.82、在普通瓊脂和SS平板上，能形成圓形、微凸、光滑濕潤(rùn)、無(wú)色半透明、邊緣整齊、在中等大小的菌落3、宋氏志賀氏菌菌落較大，較不透明，粗糙而扁平，在SS平板上可遲發(fā)酵乳糖，菌落呈玫瑰紅色。4、在肉湯中呈均勻混濁生長(zhǎng)，無(wú)菌膜。（三）生化反應(yīng)1、發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，除宋氏志賀氏菌外，均不發(fā)酵乳糖。2、不發(fā)酵側(cè)金盞花醇、肌醇、水楊苷。3、不產(chǎn)生H2S，不分解尿素，V-P試驗(yàn)陰性，不能利用檸檬酸鹽。4、甲基
2、紅陽(yáng)性，靛基質(zhì)不定。5、痢疾志賀氏菌不分解甘露醇，其它（福氏、鮑氏、宋內(nèi)氏）均可分解甘露醇。二、志賀氏菌的致病性與食物中毒（一）傳染源食物、病人、糞便、蒼蠅等（二）志賀氏菌的致病性致病因素：侵襲力、菌體內(nèi)毒素、外毒素臨床癥狀A(yù)、急性細(xì)菌性痢疾：急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。B、慢性細(xì)菌性痢疾：慢性遷延型、慢性隱伏型、慢性急性發(fā)作型。GB/T4789.5-2003中志賀氏菌檢驗(yàn)程序三、志賀氏菌的檢驗(yàn)（一）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容樣品處理→→選擇性增菌→→選擇性平板分離→→生化學(xué)試驗(yàn)→→結(jié)果報(bào)告第一次樣品處理和增菌培養(yǎng)預(yù)先準(zhǔn)備并滅菌的器材規(guī)格名稱數(shù)量1、18×180mm試管6支2、10ml移液管1支
3、3、直徑為90mm平皿2套4、250ml量筒與500毫升廣口瓶酌情7、不銹鋼湯匙1把，玻璃珠，杜氏小管酌情（一）樣品處理無(wú)菌操作稱取檢樣25g，加入裝有225mLGN增菌液的500mL廣口瓶?jī)?nèi)，固體食品用均質(zhì)器以8000-10000r/min打碎1min。（二）增菌培養(yǎng)放于36℃培養(yǎng)6～8h。培養(yǎng)時(shí)間視細(xì)菌生長(zhǎng)情況而定，當(dāng)培養(yǎng)液出現(xiàn)輕微混濁時(shí)即應(yīng)中止培養(yǎng)。第二次接種選擇性平板進(jìn)行分離培養(yǎng)（一）接種選擇性平板取增菌液1環(huán)，劃線接種于HE瓊脂平板或SS瓊脂平板1個(gè)；另取1環(huán)劃線接種于麥康凱瓊脂平板或EMB（伊紅美藍(lán)）瓊脂平板各1個(gè)。（二）培養(yǎng)放于36℃培養(yǎng)18～24h。結(jié)果：志賀氏菌在這些培
4、養(yǎng)基上呈現(xiàn)無(wú)色透明不發(fā)酵乳糖的菌落HE平板原理及反應(yīng)發(fā)酵乳糖的腸桿菌不發(fā)酵乳糖的某種腸道菌，而且產(chǎn)生硫化氫，可能是沙門氏菌不發(fā)酵乳糖，菌落呈藍(lán)綠色或藍(lán)色可能就是志賀氏菌SS平板原理及反應(yīng)SSAgar(SalmonellaShigellaAgar)大腸桿菌或者別的發(fā)酵乳糖的腸桿菌是沙門氏菌。有黑色中心。如果沒有黑色中心，就很可能是志賀氏菌了麥康凱瓊脂平板菌落為粉紅色，半透明的，可能為志賀氏菌EMB平板照片及原理菌落為無(wú)色半透明狀，可能為志賀氏菌大腸桿菌第三次初步生化試驗(yàn)（一）接種三糖鐵瓊脂和葡萄糖半固體培養(yǎng)基從HE或SS、麥康凱或EMB瓊脂平板、挑取平板上的可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂和葡萄糖
5、半固體各1管。一般應(yīng)多挑幾個(gè)菌落，以防遺漏。經(jīng)36℃培養(yǎng)18～24h，分別觀察結(jié)果。（二）培養(yǎng)放于36℃培養(yǎng)18～24h。結(jié)果：乳糖、蔗糖不發(fā)酵，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣(福氏志賀氏菌6型可產(chǎn)生少量氣體)，無(wú)動(dòng)力志賀氏菌在TSI生長(zhǎng)的結(jié)果（現(xiàn)象）：（1）斜面產(chǎn)堿仍為紅色或粉紅色；（2）底層產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，變黃色；（3）不產(chǎn)H2S，不出現(xiàn)黑色。志賀氏菌在葡萄糖半固體培養(yǎng)基生長(zhǎng)：沿線生長(zhǎng)，無(wú)動(dòng)力。三糖鐵（TSI）瓊脂試驗(yàn)的原理2－志賀氏菌3－沙門氏菌4－大腸桿菌葡萄糖半固體原理及結(jié)果。1.銅綠假單胞菌2.志賀氏菌3.枯草芽孢桿菌在志賀氏菌檢驗(yàn)中可棄去的培養(yǎng)物：（1）在TSI表面上呈現(xiàn)蔓延生長(zhǎng)的培養(yǎng)物（2
6、）在18~24h發(fā)酵乳糖、蔗糖的培養(yǎng)物（3）不分解葡萄糖，只在半固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的培養(yǎng)物。（4）產(chǎn)氣的培養(yǎng)物（5）有動(dòng)力的培養(yǎng)物（6）產(chǎn)H2S的培養(yǎng)物第四天、進(jìn)一步的 生化試驗(yàn)凡是乳糖、蔗糖不發(fā)酵，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣(福氏志賀氏菌6型可產(chǎn)生少量氣體)，無(wú)動(dòng)力的菌株，可做進(jìn)一步的生化試驗(yàn)和生化分型實(shí)驗(yàn)。（一）進(jìn)一步生化試驗(yàn)即：葡萄糖銨，西蒙氏檸檬酸鹽，賴氨酸和鳥氨酸脫羧酶，pH7.2尿素，KCN生長(zhǎng)，以及水楊苷和七葉苷的分解，36℃培養(yǎng)。志賀氏菌屬的培養(yǎng)物均為陰性結(jié)果。接種生化培養(yǎng)基從三糖鐵瓊脂上挑取培養(yǎng)物上,接種到：5%乳糖發(fā)酵、甘露醇、棉籽糖和甘油發(fā)酵、靛基質(zhì)試驗(yàn)。見P167：根據(jù)不同
7、生化反應(yīng)結(jié)果，可分為A群（痢疾志賀氏菌）、B群（福氏志賀氏菌）、C群（鮑氏志賀氏菌）、D群（宋內(nèi)氏志賀氏菌）。（二）生化分群試驗(yàn)各項(xiàng)生化試驗(yàn)現(xiàn)象葡萄糖銨：陽(yáng)性者斜面上有正常大小的菌落生長(zhǎng)，陰性者不生長(zhǎng)或生長(zhǎng)極微小的菌落。西蒙氏檸檬酸鹽：陽(yáng)性者斜面上菌落生長(zhǎng)，培養(yǎng)基由綠色轉(zhuǎn)為藍(lán)色，陰性者不生長(zhǎng)。賴氨酸和鳥氨酸脫羧酶：陽(yáng)性者為紫色，陰性者為黃色。pH7.2尿素：陽(yáng)性者為紅色，陰性者為黃色。KCN：陽(yáng)性者細(xì)菌生長(zhǎng)，陰性者細(xì)菌不生長(zhǎng)。水楊苷
