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1、實驗九實驗九新城疫病毒的雞胚培養(yǎng)新城疫病毒的雞胚培養(yǎng)與病毒滴度檢測與病毒滴度檢測揚州大學獸醫(yī)學院揚州大學獸醫(yī)學院成大榮成大榮2009年5月4日星期一一、目的要求一、目的要求1.1.掌握雞胚接種的掌握雞胚接種的常規(guī)常規(guī)方法；方法；2.2.學習學習NDVNDV的分離培養(yǎng)及其鑒定方法。的分離培養(yǎng)及其鑒定方法。二、背景知識介紹二、背景知識介紹1.1.病毒的雞胚培養(yǎng)病毒的雞胚培養(yǎng)①①雞胚雞胚是正在發(fā)育的活體是正在發(fā)育的活體：：??組織分化程度低；??細胞代謝旺盛；??適于許多病毒的生長增殖，尤其是禽類病毒。②②雞胚培養(yǎng)
2、的雞胚培養(yǎng)的優(yōu)點：優(yōu)點：??來源充足；??價格低廉；??操作簡單，無需特殊設備；??易感病毒譜較廣；??對接種的病毒不產生抗體。③③雞胚培養(yǎng)的雞胚培養(yǎng)的缺點：缺點：??非SPF雞胚，可能含有某些家禽病毒的母源抗體，甚至還可能帶有雞白痢沙門氏菌、支原體、雞白血病病毒、雞貧血病毒等。④④雞胚接種的方法：雞胚接種的方法：??尿囊腔接種：??絨毛尿囊膜接種??卵黃囊接種??羊膜腔接種??靜脈接種④④雞胚接種的方法：雞胚接種的方法：??尿囊腔接種??絨毛尿囊膜接種：??卵黃囊接種??羊膜腔接種??靜脈接種④④雞胚接種的
3、方法：雞胚接種的方法：??尿囊腔接種??絨毛尿囊膜接種??卵黃囊接種：??羊膜腔接種??靜脈接種④④雞胚接種的方法：雞胚接種的方法：??尿囊腔接種??絨毛尿囊膜接種??卵黃囊接種??羊膜腔接種：??靜脈接種④④雞胚接種的方法：雞胚接種的方法：??尿囊腔接種??絨毛尿囊膜接種??卵黃囊接種??羊膜腔接種??靜脈接種：2.2.新城疫病毒新城疫病毒①副粘病毒科/副粘病毒亞科/禽腮腺炎病毒屬。②新城疫的病原體。③形態(tài)：??病毒子多呈球形；??單股負股RNA；??核衣殼螺旋形對稱；??有囊膜；??囊膜表面有纖突。④血凝
4、性：可凝集人、雞、豚鼠和小白鼠的紅細胞。⑤病毒分離培養(yǎng)：9~11日齡雞胚尿囊腔接種。三、實驗材料三、實驗材料1.1.常規(guī)接種工具：注射器、打孔器、酒精燈等；2.2.待接種的新城疫病毒材料；3.3.9~11日齡雞胚（1個/人）；4.4.滅菌生理鹽水；5.5.其他：??鑷子、照蛋器；??酒精棉球、碘酊棉球；??固體石蠟；??滅菌瓶子、滅菌吸管等。四、實驗內容四、實驗內容以尿囊腔接種為例，介紹新城疫病毒的接種方法：以尿囊腔接種為例，介紹新城疫病毒的接種方法：1.1.照胚：照胚：取9~12日齡發(fā)育良好的雞胚，觀察氣室
5、及胚胎位置，標出氣室底邊，在無大血管處標出尿囊腔注射部位。2.2.消毒消毒??氣室向上放置雞胚于卵架上；??先后用碘酊和酒精棉球消毒蛋殼所標記的位置。距氣室底邊0.5cm3.3.打孔打孔??在所標記注射部位用剪刀尖端打孔；??注意用力要穩(wěn)，恰好使蛋殼打通而不傷及殼膜。4.4.注入病毒材料注入病毒材料??用1mL注射器抽取接種物；??針頭垂直刺入注射部位1-1.2cm即達尿囊腔內；??注入待接種的新城疫病毒：接種量為0.1~0.2mL。5.5.封孔封孔??用熔好的石蠟或消毒膠布封閉注射孔。6.6.孵育與觀察孵育
6、與觀察??氣室朝上于37℃溫箱中孵育；??以后每天檢卵1~2次。??棄去24h內的死亡雞胚：––機械損傷、細菌或霉菌污染等引起。7.7.病毒的收獲與雞胚的觀察病毒的收獲與雞胚的觀察①收集24h后死亡雞胚，置4℃冰箱過夜，以免收獲時流血;②取出冷卻的雞胚，消毒氣室端卵殼表面；③用鑷子擊破氣室部卵殼并去除殼膜，撕破絨毛尿囊膜；④以眼科鑷鑷住絨毛尿囊膜，用吸管吸取尿囊液，置無菌容器中保存?zhèn)溆谩Ｒ话隳苣蚰乙?-10mL。⑤取出雞胚胎，于平皿內觀察胚胎有無病理變化，如出血、蜷縮、侏儒胚等。8.8.新城疫病毒滴度的檢測新
7、城疫病毒滴度的檢測血凝試驗（血凝試驗（HAHA））??凡能使雞紅細胞完全凝集的病毒最高稀釋倍數(shù),稱為該病毒的血凝滴度。六、思考題六、思考題1.1.雞胚接種過程中，應該注意的問題？雞胚接種過程中，應該注意的問題？2.2.接種病毒后，接種病毒后，24h24h內雞胚死亡原因？內雞胚死亡原因？3.3.如何判斷新城疫病毒的血凝滴度？如何判斷新城疫病毒的血凝滴度？4.4.臨床上還有哪些病毒具有血凝性？臨床上還有哪些病毒具有血凝性？
