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《實(shí)驗(yàn)二 細(xì)胞器的活體染色.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、實(shí)驗(yàn)二細(xì)胞器的活體染色活體染色是能使生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織特異性著色但對(duì)活樣品沒(méi)有毒害作用或毒害作用較小的一種活體染色方法。這種方法能夠顯示活體組織或細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，但在短時(shí)間內(nèi)不影響細(xì)胞的生命活動(dòng)并且不會(huì)對(duì)活體細(xì)胞或組織造成顯著的物理、化學(xué)變化以致引起細(xì)胞的死亡?；铙w染色技術(shù)可用來(lái)研究生活狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)。根據(jù)所用染色劑的性質(zhì)和染色方法的不同，通常把活體染色分為體內(nèi)活體染色與體外活體染色兩類。體內(nèi)活體染色是以膠體狀的染料溶液注入動(dòng)、植物體內(nèi)，染料的膠粒固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊結(jié)構(gòu)里，達(dá)到易于識(shí)別
2、的目的。體外活體染色又稱超活染色，它是由活的動(dòng)、植物分離出部分細(xì)胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細(xì)胞的某種結(jié)構(gòu)上而顯色?；铙w染料之所以能固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊的部分，主要是靠染料的“電化學(xué)”特性。堿性染料的膠粒表面帶陽(yáng)離子，酸性染料的膠粒表面帶有陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離子或陽(yáng)離子，這樣，它們彼此之間就發(fā)生了吸引作用。但并非任何染料均可用于活體染色，理論上應(yīng)選擇那些對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性或毒性極小的染料，且使用時(shí)需要配成稀淡的溶液。一般說(shuō)來(lái)，最為適用的是堿性染料，這可能是因?yàn)樗哂腥芙庠陬愔|(zhì)(如卵磷
3、脂、膽固醇等)的特性，易于被細(xì)胞吸收。詹納斯綠B(JanusgreenB)和中性紅(neutralred)兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對(duì)于線粒體和液泡系的染色分別具有專一性。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?一)掌握細(xì)胞器超活染色染料的選擇及作用原理。(二)學(xué)習(xí)細(xì)胞器的超活染色技術(shù)；并能對(duì)這一技術(shù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)母倪M(jìn)和探索。二、實(shí)驗(yàn)原理線粒體是細(xì)胞進(jìn)行呼吸作用的場(chǎng)所，其形態(tài)和數(shù)量隨不同物種、不同組織器官和不同的生理狀態(tài)而發(fā)生變化。詹納斯綠B是毒性較小的堿性染料，可專一性地對(duì)線粒體進(jìn)行超活染色，這是由于線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶系的作用，
4、使染料始終保持氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài))，呈藍(lán)綠色;而線粒體周圍的細(xì)胞質(zhì)中，這些染料被還原為無(wú)色的色基(即無(wú)色狀態(tài))。中性紅是一種弱堿性pH指示劑，變色范圍pH6.4～8.0之間（由紅變黃）。在中性或微堿性環(huán)境中，植物的活細(xì)胞能大量吸收中性紅并向液泡中排泌，由于液泡在一般情況下呈酸性反應(yīng)，因此，進(jìn)入液泡的中性紅便解離出大量陽(yáng)離子而呈現(xiàn)櫻桃紅色，因而對(duì)活細(xì)胞的液泡系的染色有專一性，細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)則不著色。三、實(shí)驗(yàn)用品(一)器材：顯微鏡、恒溫水浴鍋、解剖盤、剪刀、鑷子、雙面刀片、載玻片、凹面載玻片、蓋玻片、表面皿、吸管、牙簽、吸
5、水紙。(二)材料：人口腔上皮細(xì)胞，洋蔥鱗莖，小麥或黃豆幼根根尖。(一)試劑：1.Ringer溶液：氯化鈉0.85g(變溫動(dòng)物用0.65g)氯化鉀0.25g氯化鉀0.25g氯化鈣0.03g蒸餾水100mL注：Ringer溶液是生理學(xué)實(shí)驗(yàn)常用的生理鹽溶液。2.1%、1/3000中性紅溶液：稱取0.5g中性紅溶于50mLRinger溶液，稍加熱(30~40℃)使之很快溶解，用濾紙過(guò)濾，即為1%原液，裝入棕色瓶于暗處保存，否則易氧化沉淀，失去染色能力。臨用前，取已配制的1%中性紅溶液1mL，加入29mLRinger溶液混勻，即為
6、1/3000的中性紅溶液，裝入棕色瓶備用。3.1%、1/5000詹納斯綠B溶液：稱取50mg詹納斯綠B溶于5mLRinger溶液中，稍加微熱(30~40℃)，使之溶解，用濾紙過(guò)濾后，即為1%原液。取1%原液lmL加入49mLRinger溶液，即成1/5000工作液裝入瓶中備用。最好現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充分氧化能力。一、實(shí)驗(yàn)方法(一)人口腔粘膜上皮細(xì)胞線粒體的超活染色與觀察1.取清潔載玻片放在37℃恒溫水浴鍋的金屬板上，滴2滴詹納斯綠B染液。2.實(shí)驗(yàn)者用牙簽寬頭在自己口腔粘膜處稍用力刮取上皮細(xì)胞，將刮下的粘液狀物放入載玻片
7、的染液滴中，染色10～15min(注意不可使染液干燥，必要時(shí)可再加滴染液)，3.蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去四周溢出的染液，顯微鏡下觀察。4.在低倍鏡下，選擇平展的口腔上皮細(xì)胞，換高倍鏡或油鏡進(jìn)行觀察，繪圖顯示觀察結(jié)果。(二)植物根細(xì)胞液泡系的超活染色與觀察1.實(shí)驗(yàn)前現(xiàn)將黃豆種子在培養(yǎng)皿內(nèi)發(fā)芽，待胚根長(zhǎng)到1cm以上后使用。2.用刀片切取0.5cm左右根尖，用刀片縱切根尖，置于載玻片上。3.加一滴中性紅染液，染色3～5min，吸去染液，加一滴Ringer液，再加上蓋玻片。4.用吸水紙包住載玻片和蓋玻片，拇指輕輕壓片，使根尖壓扁
8、，利于觀察。然后吸去多余的染液，切不可使載玻片和蓋玻片相對(duì)移動(dòng)。5.壓好的片子先在低倍鏡下尋找根尖細(xì)胞，再換到高倍鏡下仔細(xì)觀察，繪圖顯示液泡在根尖區(qū)的分布(三)植物表皮細(xì)胞液泡系的超活染色與觀察1.撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮或小麥葉片上表皮小塊若干，投入1/3000的中性紅溶液中染色5～10min，取出1～2片，在pH低于7
