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1、牛PAF,ELISA試劑盒雙抗夾心elisa實驗的原理牛PAF,ELISA試劑盒雙抗夾心elisa實驗的原理1.?抗體類型單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA，實際上有時候二者結(jié)合效果更好。例如，對于雙抗夾心法而言，用多抗進行捕獲而單抗進行有時更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原，隨后單抗再特異性擁有特定抗原表位的抗原。雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與抗體（不論多抗還是單抗）的配對很有講究。我們不希望捕獲抗體與抗體競爭抗原上的同一位點，為此我們就需要確保捕獲抗體和抗體所識別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和抗體之間發(fā)生了沖突，就會對實驗結(jié)果產(chǎn)生較大影響。
2、要避免這一問題，我們可以選擇購買“matchedpair”的捕獲/抗體對，這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗證才推薦的好組合。2.?實驗類型ELISA試劑盒有多種類型，不過它們都有一個共同特點，就是進行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進行捕獲。In-cell?ELISA和酶聯(lián)免疫斑點ELISPOT是兩種特殊的類型，In-cell?ELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細胞進行固定和通透化，然后再用抗體原位。ELISPOT有點像蛋白印跡Westernblot，先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細胞，然后在膜上細胞分泌的抗原形成斑點。此外，還需要根據(jù)自身
3、需要選擇96孔板或是384孔板進行ELISA實驗。通常人們使用雙抗夾心法進行ELISA實驗，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和抗體之間，這種方法既靈敏又有效，受到了許多研究者的青睞。不過有時候雙抗夾心法并不是通用的選擇，例如有時候抗原特別小讓兩個大抗體難以附著，又或者抗體只有一個抗體結(jié)合位點。在上述情況下，競爭性ELISA就更為適用，這種方法是采用帶標記的純化抗原與樣本中無標記的抗原進行競爭，以結(jié)合捕獲抗體。3.?方式如今ELISA有許多途徑，我們可以根據(jù)自己的偏好進行選擇。一般ELISA的是酶促反應的可溶性產(chǎn)物，抗體上結(jié)合有相應的酶（例如通常使用的辣根過氧化物
4、酶HRP），而反應體系中添加有相應的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）。這種酶促反應生成具有特征性的顏色，可以通過分光光度計進行，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上，也可以結(jié)合在二抗上，還可以使用鏈霉親和素標記的酶與親和素標記的一抗結(jié)合。此外ELISA的結(jié)果還包括放射性、熒光、化學發(fā)光或顯色法等。4.?交叉反應如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應就會影響整個實驗的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應的一個因素。盡管現(xiàn)在購買源自指定動物的抗體越來越容易，我們?nèi)杂斜匾_認一下是否會產(chǎn)生交叉反應的問題。在用雙抗夾心法進行ELISA時，用的二抗必須特
5、異性針對一抗，而不能與捕獲抗體起反應。如果用二抗與捕獲抗體結(jié)合，實驗特異性就會大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和一抗，來避免上述問題。與此同時，了解試劑盒中提供的buffer也是有必要的（例如washingbuffer和blockingbuffer），以免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分，使結(jié)果收到影響。牛PAF,ELISA試劑盒雙抗夾心elisa實驗的原理試劑盒操作：牛PAF,ELISA試劑盒雙抗夾心elisa實驗的原理.常見elisa試劑盒1、細胞因子試劑盒：如白介素、選擇素、集落刺激因子，腫瘤壞死因子，干擾素，轉(zhuǎn)化生長因子，
6、趨化因子，細胞因子受體，粘附分子，生長因子，凋亡因子等等2、肝纖維化elisa試劑盒：如纖維連接蛋白，透明質(zhì)酸，膠原，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子，基質(zhì)金屬蛋白酶，層粘蛋白等等3、心肌梗塞elisa試劑盒：如肌鈣蛋白，肌紅蛋白，C-反應蛋白等等4、內(nèi)分泌elisa試劑盒如甲狀腺,胰腺,性激素,孕酮,睪酮,生長激素,生長抑素,內(nèi)皮素,皮質(zhì)醇,骨鈣素,催乳素,促腎上腺皮質(zhì)激素,促卵泡素,雌二醇，雌三醇，5-羥色胺，17-羥孕酮等等E.LISA試劑盒是當前使用廣泛的一種方法。.具有直接，間接，夾心，競爭等ELISA方法。.是敏感性高，高效性，特異性強，重復性好，穩(wěn)定性的診
7、斷方法。.產(chǎn)品吸附性好，空白值低，孔底透明高。.用于(血清、血漿和細胞培養(yǎng)上清液，細胞溶解產(chǎn)物，組織勻漿，尿液和腦脊液)。5，適用于人，大小鼠，猴，牛，豬，馬，羊，雞，狗等多種種屬。6，節(jié)約材料與耗材，縮短時間，節(jié)省經(jīng)費
