凝聚胺交叉配血試驗(yàn).ppt

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1、實(shí)驗(yàn)三凝聚胺法交叉配血醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系張晨光目的：掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。原理：聚凝胺分子是帶高價(jià)陽(yáng)離子多聚季銨鹽，溶解后帶有很多正電荷可以中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，有利于紅細(xì)胞凝聚，低離子強(qiáng)度溶液也能降低紅細(xì)胞的Zeta電位，可進(jìn)一步增加抗原抗體間的吸引力。當(dāng)血清中存在IgM或IgG類血型抗體時(shí)，與紅細(xì)胞發(fā)生緊密結(jié)合，此時(shí)加入枸櫞酸鹽解聚液以消除聚凝胺的正電荷，使IgM或IgG類血型抗體與紅細(xì)胞產(chǎn)生的凝集不散開；如果血清中不存在IgM或IgG類血型抗體，加入解聚液可使非特異性凝集消失。試驗(yàn)分步原理血清紅細(xì)胞懸液加入LIM混合液Polybrene受體

2、血型抗原IgG抗體迅速致敏試驗(yàn)分步原理Polybrene上海市血液中心血Polybrene分子連接到紅細(xì)胞上加入Polybrene試驗(yàn)分步原理離心Polybrene拉近紅細(xì)胞間的距離并造成凝集1個(gè)IgG分子同時(shí)連接兩個(gè)紅細(xì)胞試驗(yàn)分步原理加入重懸液減弱了Polybrene的作用重懸液上海市血液中心血加重懸液試驗(yàn)分步原理已被血型抗體致敏的紅細(xì)胞不會(huì)散開陽(yáng)性結(jié)果試驗(yàn)分步原理未被血型抗體致敏的紅細(xì)胞很快散開陰性結(jié)果試劑:凝聚胺試劑盒；生理鹽水器材：小試管、滴管、試管架、記號(hào)筆、顯微鏡、離心機(jī)。標(biāo)本：靜脈血。操作1.取試管兩支，標(biāo)明主側(cè)次側(cè)，主側(cè)管加受血者血清

3、(血漿)1滴，和供血者3～5％紅細(xì)胞懸液(洗滌或不洗滌均可)1滴，次側(cè)管受血者3～5％紅細(xì)胞懸液(洗滌或不洗滌均可)l滴，加供血者血清(血漿)1滴。2.各加LIM溶液3滴，混合均勻后，再各加Polybrene溶液1滴，并混合均勻，置室溫1分鐘或參照說(shuō)明書。3．普通離心機(jī)1000g離心15秒，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml液體。4．輕輕搖動(dòng)試管，目測(cè)紅細(xì)胞有無(wú)凝集，如無(wú)凝集，則必須重作。5．最后加入Resuspending2滴，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管混勻并同時(shí)觀察結(jié)果。6.結(jié)果判定：如果在30秒內(nèi)（或按說(shuō)明書）凝集散開，代表是由Polybre

4、ne引起的非特異性聚集，配血結(jié)果相合；如凝集不散開，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，配血結(jié)果不相合。如反應(yīng)可疑，可進(jìn)一步倒在玻片上用顯微鏡觀察。1.可以用含EDTA抗凝血漿代替血清使用。2.若受血者血清(血漿)含肝素，如洗腎患者，須多加4～6滴Po1ybrene溶液以中和肝素。3.試劑使用前請(qǐng)放置至室溫平衡后再行操作?！咀⒁馐马?xiàng)】4.在冬天室溫極低的情況下進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)操作，由于某些受血者血清中可能含有寒冷凝集素等因素，而導(dǎo)致假陽(yáng)性的結(jié)果出現(xiàn)，建議進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)操作時(shí)室溫保持在22℃左右，最后滴加Resuspending時(shí)，將試管立即置入37

5、℃水浴中，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管混合，并在30秒內(nèi)觀察結(jié)果。5．不同的凝聚胺試劑盒操作方法各不相同，實(shí)驗(yàn)時(shí)請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作?！痉椒▽W(xué)評(píng)價(jià)】1.凝聚胺介質(zhì)配血法反應(yīng)較鹽水法靈敏度高，能檢測(cè)幾乎所有規(guī)則與不規(guī)則血型抗體，適用于各類輸血患者的配血。2.鹽水介質(zhì)配血法操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)快速，但只能發(fā)現(xiàn)完全抗體。3.酶介質(zhì)配血法操作較為簡(jiǎn)便，試劑便宜，靈敏度高；但費(fèi)時(shí)，準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性差。4.卡式配血（微柱凝膠法）已成為國(guó)際安全輸血檢查的推薦方法，該法具有：①檢測(cè)項(xiàng)目全②靈敏度高③特異性強(qiáng)④重復(fù)性好⑤客觀性好⑥節(jié)省樣品、試劑，結(jié)果易保存⑦可自動(dòng)化操作。不足之處是成本昂貴。

6、5.抗球蛋白介質(zhì)配血法是檢查不完全抗體最敏感、可靠的方法；但試劑價(jià)格較貴，操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)。謝謝大家！