實驗5-Feulgen反應和PAS反應課件.ppt

《實驗5-Feulgen反應和PAS反應課件.ppt》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、實驗5多糖的顯示——PAS反應DNA的顯示——Feulgen反應細胞化學是利用特殊的試劑與細胞的特定成分其化學變化引起顏色反應，并用顯微鏡鑒別所示物質(zhì)成分的性質(zhì)和位置的方法。一、多糖的顯示——PAS反應（一）實驗目的（二）實驗原理（三）實驗用品（四）實驗方法（五）實驗結果（六）注意事項（七）作業(yè)（一）實驗目的通過PAS反應，了解糖原顯示的基本原理、方法以及糖原在細胞中的分布。（二）實驗原理PAS反應是顯示多糖的最經(jīng)典、也是最直接的細胞化學方法。用具有強氧化作用的過碘酸處理使多糖中葡萄糖的乙二醇基氧化成兩個游離的醛基，醛基與Schiff試劑結合可形成紫紅色的化合物

2、，顏色深淺與多糖含量成正比。單糖易被抽提掉，多糖包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂、淀粉和纖維素。堿性品紅為紅色，與能產(chǎn)生SO2的試劑作用后（如偏重亞硫酸鈉與鹽酸作用，還原出SO2），成為無色的Schiff試劑,再與醛基結合呈紫紅色。（三）實驗用品1.材料：馬鈴薯塊莖2.試劑：0.5%高碘酸、schiff試劑、亞硫酸水、70％酒精3.器材：顯微鏡、刀片、鑷子、載玻片、蓋玻片、水浴鍋（四）實驗方法1、取馬鈴薯塊莖切成薄片，浸入過碘酸溶液10分鐘；2、用70％的酒精沖洗1次；3、將薄片放入Schiff試劑中20－25分鐘；4、在新配亞硫酸水中洗3次，每次1min

3、；5、蒸餾水洗片刻；6、將薄片放在載玻片上吸去水分，加上蓋玻片，鏡下觀察。PAS反應結果（五）實驗結果馬鈴薯塊莖組織細胞內(nèi)可見到紫紅色或深紅色淀粉顆粒。（六）注意事項按上述操作，細胞中水溶性糖類已喪失，被染色的是不溶性的碳水化合物。（七）作業(yè)1、繪制實驗結果，并描述。（一）實驗目的（二）實驗原理（三）實驗用品（四）實驗方法（五）實驗結果（六）注意事項（七）作業(yè)二、DNA的顯示——Feulgen反應1.了解Feulgen染色反應原理；2.掌握Feulgen染色的方法，觀察染色結果。（一）實驗目的（二）實驗原理根據(jù)DNA經(jīng)鹽酸水解后，打開了嘌呤堿基和脫氧核糖連接的鍵

4、，在脫氧核糖的一端形成游離的醛基。這些醛基就在原位與Schiff試劑結合，形成紫紅色的化合物。所以凡有DNA的部位，就呈現(xiàn)為紫紅色。圖Feulgen反應的染色原理DNA染色后，除形成紫紅色化合物外，必然有多余的A和B分子，B分子很容易被氧化轉變?yōu)锳有色分子，從而造成偽差。因此必須迅速地多次用現(xiàn)配的SO2水清洗，使A分子轉變?yōu)闊o色的B分子，消除染色的偽差。Feulgen反應是特異性顯示DNA的最經(jīng)典方法，即可進行DNA定位顯示，又可用顯微分光光度計進行定量分析。Feulgen反應對組織中DNA的檢測具有高度專一性。組織中除DNA外還有多糖、RNA和其他自由醛基可以

5、被鹽酸酸解掉。（三）實驗用品1.材料洋蔥鱗莖內(nèi)表皮或根尖、小麥根尖2.試劑1mol/LHCl、Schiff試劑、亞硫酸水溶液(漂白液)3.器材顯微鏡、刀片、鑷子、載玻片、蓋玻片、水浴鍋（四）實驗方法①取小麥根尖和洋蔥內(nèi)表皮（綠豆大?。┙腩A熱至60℃的1NHCl中水解，時間10min。②蒸餾水洗后，轉入Schiff液中避光染30min，待根尖變?yōu)樯罴t色；③在新配亞硫酸水中洗3次，每次1min；④自來水洗5min，在載玻片上切下深紅色根尖備用；⑤制片鏡下觀察，根尖鑷子搗碎壓片。（五）實驗結果蠶豆根尖細胞Feulgen反應細胞核（紫紅色）核仁（無色）小麥根尖細胞Fe

6、ulgen反應細胞核（紫紅色）核仁（無色）1.取材薄，幼嫩，大小合適。2.水解時間勿過短或過長。3.Schiff試劑質(zhì)量可靠，無色或茶色，強刺激氣味，密封，避光使用保存（6個月）。4.洗滌劑現(xiàn)用現(xiàn)配，保持有足夠的二氧化硫濃度。（六）注意事項（七）作業(yè)繪圖描述所觀察到的試驗結果。