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《LC480Ⅱ核酸擴增熒光檢測儀操作程序.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、LC480Ⅱ核酸擴增熒光檢測儀操作程序1開機：先開電腦，電腦登錄名與密碼均為LCinstall；再按儀器左側(cè)后面的主開關(guān)打開儀器。2核酸擴增標準程序2.1開機后，儀器正面的兩個狀態(tài)指示燈呈現(xiàn)橙色閃動，提示儀器正在進行初始化。當左側(cè)的狀態(tài)指示燈變?yōu)榫G色固定，右側(cè)的狀態(tài)指示燈變?yōu)槌壬潭〞r，提示儀器處于待機狀態(tài)。2.2裝載：點擊儀器正面最右側(cè)的灰色按鈕開關(guān)，儀器右側(cè)彈出多孔板加載器，將加好的反應體系（96孔板或上置8聯(lián)管的適配器）放入加載器的加載框中，注意卡槽位置相配。再次按下灰色按鈕開關(guān)，這時已放入反應板的加載器會彈出儀器
2、內(nèi)。2.3設置：雙擊電腦桌面上的LC480基礎軟件圖標，進入軟件。輸入登錄名admin和密碼Rcheo1，進入主界面，選擇“NewExpriment”開始新實驗，在“RunProtocol”菜單下依次填入本次實驗的熒光種類、反應體積，擴增反應的步驟及溫度、時間、熒光采集時間等循環(huán)參數(shù)，確認無誤后可點擊“StartRun”，開始擴增反應。2.5擴增開始后，軟件自動調(diào)至Data菜單，在此刻觀察運行狀態(tài)和過程。2.6樣品孔命名：點擊“SampleEditor”可按照提示的三步法對樣品進行編輯，第一步選擇“AbsQuant”絕對
3、定量，第二步選擇要命名的孔，第三步給選定的孔命名并選擇樣品類型。2.7反應結(jié)束后，按灰色按鈕彈出加載器，取出96孔板或適配器。2.8在軟件上點擊“Analysis”，選擇分析方法，確認之后，出現(xiàn)結(jié)果，可以進行分析。3結(jié)果分析標準程序：結(jié)果曲線的分析，應按以下步驟進行：全部曲線——陰性對照——陽性對照——陽性室內(nèi)質(zhì)控品——陽性標準品——逐個分析（標出陽性標本和可疑標本）——調(diào)整參數(shù)，獲得較好的標準曲線，顯示定量結(jié)果——登記，發(fā)報告。3.1整體曲線的觀察：將所有曲線選中進行整體觀察a）觀察是否存在污染情況（包括標本污染和試劑
4、污染），特別應注意大量曲線在同一Ct值出現(xiàn)上漲的情況。b）觀察是否有光路傳導阻滯或電壓波動等機器原因形成的異常曲線。3.2陰性對照的分析陰性對照：試劑中加入與待檢標本進行同樣處理的已知陰性標本。作用：用以監(jiān)測實驗室和前處理過程中是否存在污染。3.3陽性對照的分析陽性對照：試劑中加入與待檢標本進行同樣處理的已知陽性標本。作用：用以監(jiān)測實驗能否正常檢出陽性標本，避免假陰性的出現(xiàn)。3.4陽性室內(nèi)質(zhì)控品的分析陽性室內(nèi)質(zhì)控品：試劑中加入與待檢標本進行同樣處理的已知或未知濃度的陽性室內(nèi)質(zhì)控血清。作用：用以監(jiān)控日常實驗的精密度。3.5
5、陽性標準品的分析a）各梯度曲線的分布是否均勻，若各梯度曲線均未分開，則表明陽模稀釋可能存在問題，提示實驗中存在較大人為誤差。b）觀察各曲線的Ct值是否在平日的正常位置。情況1：若出現(xiàn)低拷貝標準品做不出，而各曲線Ct值均后移，則判斷是否為試劑擴增效率下降（如試劑過期或保存條件不合格）。情況2：出現(xiàn)低拷貝標準品做不出，而高拷貝曲線Ct值均正常，則提示可能存在低拷貝陽性標準品的降解情況。c）每日必做103標準品，用作以下三方面監(jiān)控：一是否存在操作誤差，如加樣量過少等原因?qū)е?03標準品未能檢出；二是否存在稀釋后的梯度放置過久，
6、低拷貝標準品降解的情況；三是若高拷貝標準品出現(xiàn)Ct值后移，且能排除情況A、B，則判斷是否為試劑靈敏度下降。3.6單個曲線的判斷逐個分析每條曲線，判斷曲線的陰陽性或?qū)倏梢汕€。（可疑標本是指曲線在37個Ct值后出現(xiàn)上漲且平臺趨勢不明顯或上漲幅度比較低的標本。可疑標本要第二天重做，兩次結(jié)果一致則報陽性，否則結(jié)果報陰性。）3.7得出定量結(jié)果調(diào)節(jié)基線和閾值以得到一較好的標準曲線。電腦據(jù)此曲線給出陽性結(jié)果值。此時應排除某些陰性標本因熒光曲線假性上揚而得出的假陽性結(jié)果和某些弱陽性標本因終末熒光值過低而顯示的假陰性。3.8發(fā)放報告及時
7、登記檢測結(jié)果記錄，發(fā)放臨床報告。4關(guān)機：先關(guān)電腦，再按儀器左側(cè)后面的主開關(guān)關(guān)閉儀器。5儀器的維護和保養(yǎng)5.1微軟WindowsXP工作站的維護5.1.1做好每日的清潔工作。5.1.2每月進行鍵盤鼠標的消毒工作，使用10%84消毒液擦拭。5.1.3硬盤驅(qū)動器每月25日左右運行一次碎片清除程序。5.1.4每日數(shù)據(jù)按照數(shù)據(jù)管理辦法進行保存，每周五整理一次數(shù)據(jù)文件夾，每月26日進行一次數(shù)據(jù)備份到光盤，每年12月30日更換一次備份光盤，上一年度光盤存檔。5.2PCR儀的維護和保養(yǎng)5.2.1做好每日的清潔工作。5.2.2每日實驗完畢
8、，待儀器散熱完全之后，使用防塵罩防塵。5.2.3根據(jù)儀器提示信息，更換所需配件。
