鬼筆環(huán)肽標記法觀察微絲的分布.pdf

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1、中國醫(yī)學裝備!""#年$月第!卷第$期%&’()*+,’-)./01’23+(4!""#51(+67.8!9:8$EH+研究與報告,細胞骨架的激光共焦研究技術M22.’-)4’7(7N%7(N7-).<)O+J=-)((’(P*’-J7O-72Q’(-Q47OL+.+47(J+O+)J-&劉繼紅"蔡學泳"何其華#北京大學醫(yī)藥衛(wèi)生分析中心"北京G"""?I’(文章編號)G$R!C?!R"*!""#$"$CEHC"I(中圖分類號)SIG!(文獻標識碼)T+摘要,激光掃描共聚焦顯微鏡*%<=*’是細胞骨架研究的新手段"本文簡要介紹了細胞骨架的

2、共焦研究技術"包括細胞骨架的熒光標記方法和共焦圖像采集與處理技術"分析了%<=*在細胞骨架研究中的優(yōu)勢%+關鍵詞,激光共聚焦顯微鏡-細胞骨架!"#$%&’$(%7(N7-).<)O+J=-)((’(P*’-J7O-72Q’O)(+UJ+O+)J-&3+4&7,’(-Q47OL+.+47(V)22.’-)4’7(7N4&’O4+-&(’01+’(-Q47OL+.+47(J+O+)J-&’O,+O-J’K+,V’(-.1,’(PN.17J+O-+(-+2J7K+O)(,%7(N7-).’3)P+)-01’J+)(,’3)P+2J7-+OO7

3、N-Q47OL+.+47(J+O+)J-&8M,W)(4)P+7N4&+O+4+-&(’01+)J+).O7)().QO+,8)*+,-%.#(%7(N7-).<)O+J=-)((’(P*’-J7O-72Q--Q47OL+.+47(激光掃描共聚焦顯微鏡;%<=*>是?"年代發(fā)展起來動"就可得到樣品不同層面連續(xù)的光切圖像%我們將從的目前世界上先進的分子細胞生物學分析儀器"較傳統(tǒng)共聚焦顯微鏡系統(tǒng)獲得的連續(xù)光切圖像比喻為顯微%A"顯微鏡有著不可比擬的優(yōu)越性%傳統(tǒng)的熒光顯微鏡是采從這些連續(xù)的光切圖像可通過三維重組模擬出樣品真用很寬的照明光束照射

4、在整個樣品上"樣品整個厚度被實的立體結構%同時連續(xù)照明"樣品的焦平面以及焦平面以外的結構共共聚焦顯微鏡憑借其特有的成像原理大大提高了同成像"造成圖像的模糊%這使目鏡中的整個圖像分辨分辨率"它在BCD平面的橫向分辨率比普通的顯微鏡要率降低"清晰度下降%當樣品比較厚時這種現(xiàn)象尤其突高出約E"F"而且它還可以對厚樣本進行非介入無損傷出"而激光掃描共焦顯微鏡解決了這個問題%性連續(xù)光學切片"得到三維重組的空間立體圖像%!激光共聚焦顯微鏡的工作原理近十年來"人們已廣泛應用%<=*來觀察和分析細激光共聚焦顯微鏡選用單色性好"單向性好的激光胞內(nèi)的微細結

5、構和分子在細胞內(nèi)的分布"觀察細胞內(nèi)離作為光源%激光通過一個照明針孔到達樣品"樣品只被子"蛋白分子的變化"包括細胞內(nèi)鈣"活性氧"轉(zhuǎn)錄因子"一個具有精密幾何形狀的光點照射在焦平面上"只有被表面分子"細胞凋亡"細胞膜流動性"細胞內(nèi)分子的運照射到的特定點所發(fā)射的熒光通過探測針孔到達檢測動"細胞間的縫隙連接"蛋白間的相互作用等%共聚焦的器"該點以外的任何發(fā)射熒光均被該針孔阻擋%照明針分析研究已經(jīng)涉及了生物學的幾乎所有領域%孔與探測針孔對被照射點或被探測點來說是共軛的"這$細胞骨架的共聚焦研究技術就是激光掃描共焦顯微鏡系統(tǒng)中共焦的真正含義%激光GH

6、$I年"=.)14+JK)-L采用戊二醛常溫固定方法"首共聚焦顯微鏡利用光電倍增管采集和放大信號%計算機先使用電鏡在水螅刺細胞中發(fā)現(xiàn)了微管%隨后"微絲和以像點的方式將成像點顯示在屏幕上"由光路中的掃描中間絲相繼被發(fā)現(xiàn)%它們廣泛存在于真核細胞中"細胞系統(tǒng)在整個樣品上掃描"在顯示器上產(chǎn)生一幅完整圖骨架蛋白的含量占細胞總蛋白含量的G"!&&I"!"它像%這幅圖像即為焦平面的共焦圖像%只要載物臺沿著們與細胞形態(tài)的維持"細胞器的空間定位及位置改變"@軸上下移動"將樣品新的一個層面移到共焦面上"樣細胞的運動"細胞內(nèi)的物質(zhì)運輸"細胞內(nèi)的信號傳導"免品

7、的這個新層面又成像在顯示器上%隨著@軸的不斷移疫行為和細胞分裂等活動有密切的關系%作者簡介!劉繼紅"女"#!"#$%$碩士%#"中國醫(yī)學裝備!""#年$月第!卷第$期%&’()*+,’-)./01’23+(4!""#51(+67.8!9:8$細胞骨架主要有微管!3’-;741<.+"*=#"微絲和組織的空間圖像$>3’-;7?’.)3+(4"*@A中間絲>’(4+;3+,’)4+?’.)3+(4"B@C三種類!8V卵細胞紡錘體的激光共焦研究技術型$它們分別由不同的蛋白單體組裝而成"其中微管蛋以下就以家兔卵細胞的紡錘體的共焦研究為例來白!

8、41<1.’(%&肌動蛋白!)-4’(%&波形蛋白!D’3+(4’(%等是說明細胞骨架共焦研究技術和方法$細胞骨架的重要組成部分"也是最常被研究的細胞骨架!8V8E*BB期卵母細胞紡錘體的熒光染色’卵母細胞