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《細(xì)胞示蹤技術(shù)與應(yīng)用(GFP)課件.ppt》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、李京寶2011.11.25細(xì)胞示蹤技術(shù)與應(yīng)用(greenfluorescentprotein,GFP)1主要內(nèi)容GFPGFP的研究歷史GFP的應(yīng)用學(xué)習(xí)要點(diǎn)基本特性機(jī)遇與重視開闊視野2GFP——基本性狀3簡(jiǎn)介綠色熒光蛋白(greenfluorescentprotein)，簡(jiǎn)稱GFP最早是由下村修等人在1962年在水母中發(fā)現(xiàn)。其基因所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，在藍(lán)色波長(zhǎng)范圍的光線激發(fā)下，會(huì)發(fā)出綠色熒光。由水晶水母（Aequoreavictoria）中發(fā)現(xiàn)的野生型綠色熒光蛋白，395nm和475nm分別是最大和次大的激發(fā)波長(zhǎng)，它的發(fā)射波長(zhǎng)的峰點(diǎn)是在509nm4分子結(jié)構(gòu)238aa,單鏈;二聚體,β-桶狀結(jié)構(gòu);單
2、體：11個(gè)β-折疊包圍一個(gè)α-螺旋；β-桶狀結(jié)構(gòu)直徑約3nm，高約4nm，規(guī)則的氫鍵帶；其末端的短α螺旋以及環(huán)狀結(jié)構(gòu)一起組成一個(gè)單獨(dú)的致密結(jié)構(gòu)域；5發(fā)光機(jī)制生色基團(tuán)附著于α-螺旋上，幾乎完美的包被于桶狀結(jié)構(gòu)中心。六肽組成的發(fā)光中心發(fā)光團(tuán)（三肽）Ser65-Tyr66-Gly67經(jīng)過環(huán)化形成了對(duì)羥基苯咪唑啉酮。自身催化環(huán)化的結(jié)果有氧過程，O2使Tyr66脫氫氧化。6特點(diǎn)GFP熒光極其穩(wěn)定；中度氧化劑對(duì)GFP熒光影響也不大；靈敏度高,抗光漂白能力強(qiáng)；熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物。7GFP的研究歷史——從下村修到錢永健8TheNobelPrizeinChemistry2008"forthedi
3、scoveryanddevelopmentofthegreenfluorescentprotein,GFP"OsamuShimomuraMartinChalfieRogerY.Tsien錢永健馬丁·查爾菲下村脩2008年10月8日9下村脩（1928年8月27日－），有機(jī)化學(xué)家、海洋生物學(xué)家1928年生于日本京都，1960年獲得日本名古屋大學(xué)有機(jī)化學(xué)博士學(xué)位美國(guó)WoodsHole海洋生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室（MBL）波士頓大學(xué)醫(yī)學(xué)院名譽(yù)退休教授10小海螢（Cypridinahilgendorfii）1955,NagoyaUniversity,laboratoryofProf.YoshimasaHirata
4、.11FridayHarbor,1961.AequoreavictoriaProf.FrankJohnson‘sLab,Princeton,NJ,195912ShimomuraO,JohnsonF,SaigaY(1962)."Extraction,purificationandpropertiesofaequorin,abioluminescentproteinfromtheluminoushydromedusan,Aequorea".JCellCompPhysiol59:223–39水母素aequorinGFP13600ringsperhour（10timesmorethanbyhand.
5、）30–40bucketfulsofjellyfisheachday.1mgofAF-350150mgofpurifiedaequorin50,000jellyfish.2004141974年，純化到了這個(gè)蛋白，時(shí)稱綠色蛋白、以后稱綠色熒光蛋白GFP。同年，熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)在生物中發(fā)現(xiàn)“熒光素——GFP”1979年，GFP的發(fā)色基團(tuán)確定酶解法151992年，DouglasPrasher拿到了GFP的基因（WoodsHole海洋研究所）"(DouglasPrasher's)workwascriticalandessentialfortheworkwedidinourlab.They
6、could'veeasilygiventheprizetoDouglasandtheothertwoandleftmeout."------MartinChalfie"I'mreallyhappyforthem.Iwasreallysurprisedthatparticulartopiccarriedthatmuchweight."------DouglasPrasher16馬丁·查爾菲（MartinChalfie，1947年－），美國(guó)科學(xué)家成長(zhǎng)于美國(guó)芝加哥1977年獲得美國(guó)哈佛大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)博士學(xué)位1982年起任美國(guó)哥倫比亞大學(xué)生物學(xué)教授。17Chalfie,M.,Tu,Y.,Euskir
7、chen,G.,Ward,W.W.,andPrasher,D.C.(1994),“Greenfluorescentproteinasamarkerforgeneexpression,”Science263:802–805.18錢永健RogerYonchienTsien（1952年2月1日－）美國(guó)生物化學(xué)家美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院士美國(guó)國(guó)家醫(yī)學(xué)院院士美國(guó)藝術(shù)與科學(xué)院院士圣地牙哥加利福尼亞大學(xué)生物化學(xué)及化學(xué)系教授。197
