羧甲基殼聚糖對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響研究.pdf

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1、第4l卷第9期2011年9月中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)PERl0DlCAL0F0CEANUNIVERSITY0FCHINA41(9)：036～040Sep．，20ll羧甲基殼聚糖對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響研究’劉萬(wàn)順1，鄭美玲1，韓寶芹1，亢壽海2，李南1(1．中國(guó)海洋大學(xué)海洋生命學(xué)院，山東青島266003；2．江蘇省腫瘤研究所，江蘇南京210008)摘要：研究評(píng)價(jià)了不同分子量及不同取代度的3種羧甲基殼聚糖(cMcTs)對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。用M兀、比色法測(cè)定3種CM—CTS對(duì)人正常肝細(xì)胞L02及3株腫瘤細(xì)胞：Bel_

2、7402、S(；C-7901及Hela生長(zhǎng)的影響；ELISA方法檢測(cè)3種CM—CTS對(duì)2種肝細(xì)胞L02及Bel一7402分泌TG卜a及ⅥⅪF水平的影響；建立小鼠移植性腫瘤Heps模型，腹腔注射分子量最大的CM—I，研究cM—Crs的抑瘤作用。研究結(jié)果表明，分子量及取代度不同的3種CM一(、TS在O．05～O．8mg／n1L濃度范圍內(nèi)，對(duì)L02細(xì)胞增殖具有顯著促進(jìn)作用，對(duì)Bel一7402、SoC-7901及Hela細(xì)胞的增殖則具有一定的抑制作用；3種CMJ：Ts能提高L02細(xì)胞1、GF-a分泌水平

3、，抑制Bel一7402細(xì)胞分泌TGpa及VEGF水平；在動(dòng)物水平上，CMCTS能抑制小鼠Heps腫瘤生長(zhǎng)，且量效關(guān)系顯著。說(shuō)明不同分子量及取代度的3種羧甲基殼聚糖對(duì)腫瘤生長(zhǎng)具一定的抑制作用。關(guān)鍵詞：羧甲基殼聚糖；腫瘤；細(xì)胞因子中圖法分類(lèi)號(hào)：[q1539+．7]；R735．7文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1672—5174(2011)09一036一05羧甲基殼聚糖(carboxymethylchitosan，CM—CTs)是殼聚糖改性研究和應(yīng)用研究最多的1種殼聚糖衍生物，具有良好的水溶性、優(yōu)良的成膜性和

4、保濕性等，在日化、食品、醫(yī)藥及醫(yī)用生物材料等領(lǐng)域中具有廣泛的應(yīng)用前景[1]。CM—CTS作為生物醫(yī)用材料在燒傷敷料、防術(shù)后黏連材料、藥物載體及酶抑制劑等領(lǐng)域中研究較多[2

5、。CM—CTS含有一NH。和一C00H，其分子量和羧基取代度不同，使生物學(xué)活性存在較大差異。細(xì)胞水平的研究證明，CM-CTS具有促進(jìn)正常細(xì)胞生長(zhǎng)的作用[3]，而其對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響則報(bào)道較少，故開(kāi)展CM-CTS對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響具有重要的理論意義和實(shí)際意義。本實(shí)驗(yàn)旨在研究不同分子量及不同羧化度的CM—CTS對(duì)人正常肝細(xì)胞L02

6、及3株腫瘤細(xì)胞：Bel—7402、SC￡一7901及Hela體外增殖及相關(guān)細(xì)胞生長(zhǎng)因子分泌水平的影響，以及對(duì)Heps小鼠腫瘤生長(zhǎng)的影響，為CM-CTS在生物醫(yī)用材料領(lǐng)域的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。1材料與方法1．1材料3種CM_CTS樣品均由本實(shí)驗(yàn)室制備，分別標(biāo)記為CM_I、CM一Ⅱ及CM-Ⅲ。人正常肝細(xì)胞L02及人肝癌細(xì)胞Bel．7402購(gòu)自中國(guó)海洋大學(xué)藥物研究所；人胃癌細(xì)胞sGC_7901及人宮頸癌細(xì)胞Hela由中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所提供。4種細(xì)胞均于含10％新生牛血

7、清的RPMll640培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)，o．25％胰酶消化傳代；昆明種小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量(20±1)g，由南京安立默實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖中心提供。Heps荷瘤小鼠購(gòu)自北京鼎國(guó)生物科技有限公司。1．2試劑與儀器RPMll640培養(yǎng)基(Gibco)，新生牛血清(Hy—clone)，胰蛋白酶和MTT(Sigma)，人TGF-。【和VEGFELISA試劑盒(上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。真空冷凍干燥機(jī)(Labconco)，高效液相色譜儀(美國(guó)waters)，倒置顯微鏡(日本01ympus

8、)，超凈工作臺(tái)、BBl6FC02培養(yǎng)箱(上海力申科學(xué)儀器有限公司)，Ray—t02100C酶標(biāo)儀(深圳雷杜生命科學(xué)有限公司)。1．3實(shí)驗(yàn)方法1．3．1材料純化及性質(zhì)研究CM—I、CM一Ⅱ及CM一Ⅲ樣品于三蒸水中溶解透析，經(jīng)o．22腳濾膜過(guò)濾，真空冷凍干燥。GPC—HPI￡測(cè)定樣品分子量，流動(dòng)相：O．02MPBS溶液；流速：O．8mL／min；柱溫：35℃；示差檢測(cè)器；右旋糖苷標(biāo)樣。采用電位滴定法測(cè)定羧基取代度L4j。1．3．2體外細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期L02、Bel-7402、SGC-790l

9、及Hela細(xì)胞，胰酶消化后，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×104／mL，接種于96孑L板，每孔200肛L。實(shí)驗(yàn)設(shè)不同濃度CM—CTS實(shí)驗(yàn)組，細(xì)胞對(duì)照組及空白對(duì)·基金項(xiàng)目：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(2007AA091603)資助收稿日期：2011一01—17；修訂日期：20ll—04一18作者簡(jiǎn)介：劉萬(wàn)順(1950一)，男，博導(dǎo)，從事生物化學(xué)與海洋生物材料研究。E-nmil：WanshunLiu@hotmail．㈣9期劉萬(wàn)順，等：羧甲基殼聚糖對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響研究照組。常規(guī)培養(yǎng)24h待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)良好時(shí)，