HPLC法測(cè)定黃芪中的黃芪甲苷含量.doc

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1、HPLC法測(cè)定黃芪中的黃芪甲苷含量摘 要:用HPLC法測(cè)定了黃芪甲苷含量.樣品從東北黃芪中提取,用色譜純甲醇溶解并稀釋,采用YWG-C18柱,流動(dòng)相為甲醇,在205nm下檢測(cè),靈敏度為0.1AUFS,測(cè)定了黃芪甲苷的含量.平均回收率為96.1%,RSD為2.15%,結(jié)果表明,樣品濃度在0.01~0.2mg/mL之間與峰面積成良好的線性關(guān)系.High-performanceLiquidChromatographicDeterminationofAstragalosideinAstragalusmembranaceu

2、s(Fisch.)Bunge.TianFeng,DengYingjie(DepartmentofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110015)Abstract:Asensitivemethodwasdevelopedtodetermineastragalosidebyhigh-performanceliquidchromatographywiththeC18column.ThemobilephasewasmethanolandtheUVabsor

3、bencywasmonitoredat205nm.ThisassaydemonstratedthatastragalosidehadadequatesensitivityandselectivitytomeasuretheconcentrationsofastragalosideinAstragalusmembranaceus(Fisch.)Bunge.Keywords:highperformanceliquidchromatography;astragaloside;Astragalusmembranaceus

4、(Fisch.)Bunge.▲  黃芪為常用中藥,素有“補(bǔ)藥之長(zhǎng)”之稱,具有益氣固表,利尿托毒等功效.黃芪藥用價(jià)值很高,臨床上常用來(lái)治療非特異性免疫功能低下、乙肝和心血管系統(tǒng)疾病.黃芪甲苷作為黃芪成分之一,其化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示,它具有降壓、抗炎、穩(wěn)定紅細(xì)胞膜、提高血漿cAMP含量,促進(jìn)小鼠再生肝DNA合成和增強(qiáng)免疫功能等多種作用〔1〕.因此在研究黃芪過(guò)程中,我們對(duì)其成分黃芪甲苷進(jìn)行了含量測(cè)定方法研究.已有的測(cè)定方法多為薄層掃描法〔2〕和香草醛-硫酸比色法〔3〕,前者操作繁瑣,背景干擾多,誤差較大;后者空白吸收值高

5、,受時(shí)間因素干擾大,均難以準(zhǔn)確測(cè)定.本文試用HPLC法測(cè)定黃芪甲苷的含量.其樣品濃度的范圍在0.01~0.2mg.mL之間與峰面積呈線性,該法靈敏度高,重現(xiàn)性好,可準(zhǔn)確地測(cè)定東北黃芪甲苷的含量.Fig.1 Theformulationofastragaloside1 儀器與方法  儀器:Waters高效液相色譜儀,510型泵,490E紫外檢測(cè)儀.對(duì)照品 黃芪甲苷購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所.樣品 黃芪飲片(生品),購(gòu)自沈陽(yáng)京盛藥店,本校許春泉教授鑒定為東北黃芪.試劑 乙腈(色譜純,天津四友生物醫(yī)學(xué)公司)、甲醇(色譜

6、純,天津四友)、正丁醇(分析純)、乙醚(分析純)、水、重蒸餾水、去離子水、中性氧化鋁(層析用)、輕質(zhì)氧化鎂(AR).2 方法與結(jié)果2.1 色譜條件色譜柱:YWG18柱2504.6mm10μL,大連依利特科學(xué)儀器有限公司;流動(dòng)相:甲醇(色譜純);流速:0.8ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):205nm;靈敏度:0.1AUFS.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取10.03mg黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品,置于50mL容量瓶中,加入色譜純甲醇溶解并定容,分別精密吸取0.5、1.5、2.5、5、10mL用甲醇稀釋并定容于10mL容量瓶中,用0.45

7、μ微孔濾膜過(guò)濾,進(jìn)樣20μL,按上述色譜條件測(cè)定.在tR=3.375左右有唯一吸收峰,以峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo),得一工作曲線.回歸方程為A=0.1717C+0.4657,r=0.9996,線性范圍0.01~0.2mg/mL-1,如表1所示.Tab.1 TheconcentrationandpeakareaofthestandardsampleC/(mg.mL-1)×10-1Peakarea/×1060.10.48300.30.50780.50.55211.00.63302.00.82002.3 精密度實(shí)

8、驗(yàn)精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品4.50mg,用甲醇溶解并定容于10mL容量瓶中,精密吸取20μL進(jìn)樣,連續(xù)5次,測(cè)定峰面積,其RSD為2.14%.2.4 回收率試驗(yàn)取5g已測(cè)定黃芪甲苷含量的生藥提取水煎液平均分成10份,取5份,再分別準(zhǔn)確加入1.447mg/mL的黃芪甲苷對(duì)照品溶液0.5mL,按“樣品測(cè)定”項(xiàng)下方法操作,結(jié)果見表2.Tab.2 Theresultsofrecov

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