黃芪注射液中黃芪甲苷含量測定hplc法的比較研究

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1、2Ol1年8月Aug．，2Oll第24卷第4期VO1．24NO．4黃芪注射液中黃芪甲苷含量測定HPLC法的比較研究李燕(十堰職業(yè)技術(shù)學(xué)院生化與環(huán)境工程系，湖北十堰442000)[摘要]采用等度洗脫的高效液相色譜法，對黃芪注射液中主要微量物質(zhì)黃芪甲苷的含量進(jìn)行測定，通過對不同樣品的分析比較，建立了最佳提取條件和檢測條件。該法操作簡便迅速，精密度和準(zhǔn)確度均較理想，穩(wěn)定性強(qiáng)，回收率高，可為測定黃芪注射液中黃芪甲苷提供方法依據(jù)。[關(guān)鍵詞]高效液相色譜法；黃芪注射液；黃芪甲苷；提取[中圖分類號(hào)]R917[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1008—4738(2011)04—0104—02在我國常見

2、藥物中，具有營養(yǎng)和抗氧化等藥理加熱回流提取2次，得到提取液200ml，然后進(jìn)行減壓活性和藥用價(jià)值的，多為對羥基苯甲酸和對羥基肉濃縮得到濃縮液約i00ml。然后重復(fù)濃縮液萃取得到桂酸的衍生物，這類藥物與人體健康密切相關(guān)[1][。黃芪甲苷粗品約25．0mg，經(jīng)HPLC檢測純度超過黃芪中含有的黃芪皂苷、黃酮等化合物具有較強(qiáng)的80。再進(jìn)行反相硅膠@18常壓色譜柱分離，60％甲生物活性[3Ⅱ，黃芪注射液可用于治療細(xì)胞免疫功醇洗脫，得到黃芪甲苷純品約l3．5mg，HPLC檢測純能低下的慢性肝炎和慢性活動(dòng)性肝炎，效果良好，也度符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。具體HPLC圖與主峰含量見圖1可用于治療白細(xì)胞減少癥及

3、血小板減少性紫癜。對與表1。同時(shí)掃描結(jié)果顯示，黃芪甲苷在325nm波蒙古黃芪中的皂苷類和黃酮類有效成分的分析研究長處吸收最強(qiáng)，靈敏度較高。以峰面積積分值為縱表明，皂苷類成分共14個(gè)共有峰，黃酮類成分共有坐標(biāo)，對照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸12個(gè)共有峰，顯示其化學(xué)成分復(fù)雜，對于有效物質(zhì)方程：黃芪甲苷Y=13．614X—1．4897，r一0．9999。的提取檢測要求高]L。線性范圍為lO．2—102ug／mL。1材料與儀器試劑：95乙醇；無水乙醇；氯仿；正丁醇；丙酮；無水乙醚；鹽酸；碳酸鋇；乙酸酐。以上試劑均為分析純。儀器：UV～2401P紫外分光光度儀(島津公司)，TG3

4、28B光電分析天平(島津公司)；CKQ～250DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。Gilentlloo高效液相色譜儀(島津公司)；HH—S2系列恒溫水浴鍋(島津公司)；FTIR一8400S*圖1黃芪甲苷純品HPLC色譜圖型紅外光譜儀(島津公司)；GSP一84—02型磁力恒溫表1重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果攪拌器(島津公司)。黃芪注射液(萬通藥業(yè)公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字Z23O20820／Z2302O822)。2方法與結(jié)果2．I黃芪甲苷的提取黃蓖注射液50n1加入6倍體積量(V／V)的6O乙醇，Na()H飽和溶液調(diào)節(jié)pH至l2，溫度：6()℃，[收稿日期]2O11—06l6[作者簡

5、介]乍燕f[972)，女，I-耀職業(yè)技術(shù)學(xué)院啦fL環(huán)境r程系講師。一l0l一李燕：黃芪注射液中黃芪甲苷含量測定HPLC法的比較研究2．2樣品的準(zhǔn)備3討論將3份不同生產(chǎn)日期生產(chǎn)的黃芪注射液抽提后當(dāng)前黃芪甲苷的測定方法有薄層色譜法放置2OmL容量瓶中，用提取液約15mL浸泡，室(TLC)、毛細(xì)管電泳法(CZE)等L7][，但這些測定方溫下放置4小時(shí)，然后超聲提取3O分鐘，過濾后濾法都普遍存在靈敏度不高、重復(fù)性不強(qiáng)的現(xiàn)液于物理蒸干溶劑，殘?jiān)?mL甲醇一甲酸溶解，象[9][]。本試驗(yàn)建立了測定黃芪注射液中黃芪甲然后定容于5mL容量瓶中，4℃下保存待測。苷的HPLC法，采用反相硅膠C—l

6、8常壓色譜柱分2．3精密度和準(zhǔn)確度離，60甲醇洗脫，在選擇檢測波長時(shí)，以流動(dòng)相為取混合對照品溶液2OmL，進(jìn)行HPLC檢測，溶劑稀釋對照品，采用紫外分光光度法在200—400連續(xù)進(jìn)樣6次，測得黃芪甲苷面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差掃描吸收光譜，結(jié)果表明黃芪甲苷在325nm處有分別為0．59，顯示其精密度良好。然后精密稱取最大吸收，靈敏度較高，故選定325nlTl為檢測波已知含量的3份黃芪甲苷樣品，按樣品準(zhǔn)備與處理長。最佳提取條件為：乙醇用量6倍于注射液體積，方法制備計(jì)算回收率，結(jié)果分別為95．9、94．5提取溫度為60℃，pH值為l2。同時(shí)HPLC法操作和95．O，顯示其回收率高。具體情況見

7、表2。簡便迅速，精密度和準(zhǔn)確度均較理想，穩(wěn)定性強(qiáng)，回表2黃芪甲苷樣品黃芪甲苷的回收率(n3)收含量高，可為測定黃芪注射液中黃芪甲苷物質(zhì)提樣品回收率供方法依據(jù)。195．9％294．5％[參考文獻(xiàn)]395．0[13竺心影．藥理學(xué)[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：326，2．4穩(wěn)定性試驗(yàn)328．3份樣品按照制備方法制備溶液后，分別于0[2]BeconiBarkerMG．Dertrminationofeeftiofuranditsdesfumyleeffiofurrelatedme