靈芝多糖的深層液體培養(yǎng)技術.doc

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1、靈芝多糖的液體培養(yǎng)技術班級：檢驗檢疫1202姓名：趙卓學號：20120330071靈芝液體的深層發(fā)酵41.1生產(chǎn)菌種的選育41.2培養(yǎng)基的優(yōu)化51.3發(fā)酵條件的控制52靈芝多糖的分離提取及結(jié)構(gòu)分析62.1靈芝多糖的提取純化62.2靈芝多糖的分子結(jié)構(gòu)63靈芝多糖的生物學活性73.1抗腫瘤活性73.2免疫調(diào)節(jié)作用73.3其它生物學活性7靈芝多糖的液體培養(yǎng)技術摘要：靈芝多糖由于具有抗腫瘤、抗放射、提高免疫力、抗愛滋病毒等多方面的生物活性，引起了人們的廣泛重視.一般靈芝多糖的提取主要從靈芝子實體屮獲得,而人工栽培靈芝子實體生產(chǎn)周期長，產(chǎn)量低?釆用液體發(fā)酵培養(yǎng)靈芝菌絲體,獲得靈芝多糖，具有培養(yǎng)周

2、期短，工藝簡單，原料易得，成本低,適于工廠化生產(chǎn)等顯著優(yōu)點?本文對靈芝多糖菌絲體的液體深層發(fā)酵作進一步的介紹。關鍵詞：靈芝多糖；菌絲體；發(fā)酵；液體培養(yǎng)Keywords:GanodermalucidumPolysaccharideMycelium;Fermentation;SubmergedCulture1靈芝液體的深層發(fā)酵傳統(tǒng)上，靈芝是通過野外采集或人工栽培獲得，以子實體或抱子粉入藥。但靈芝野外采集數(shù)量有限，難以適應大生產(chǎn)要求,而人工栽培靈芝周期長、勞動強度大、生產(chǎn)效率低，又受環(huán)境、季節(jié)等限制,易遭病蟲害,產(chǎn)量與質(zhì)量不穩(wěn)定。從20世紀40年代發(fā)展起來的食用菌液體深層發(fā)酵技術，與子實體的

3、栽培相比具有明顯的優(yōu)勢。液體深層發(fā)酵生產(chǎn)工藝簡便、周期短、省時省力，而且所得副產(chǎn)物少、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，可以進行大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。靈芝作為--種重要的食藥用真菌，國內(nèi)外對其液體深層發(fā)酵也做了大量研究。靈芝的液體深層發(fā)酵培養(yǎng)的基本流程是:斜面母種一一級搖瓶種子培養(yǎng)一二級搖瓶種子培養(yǎng)一種子罐培養(yǎng)一發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)一放罐提取發(fā)酵物。影響靈芝等真菌的液體深層發(fā)酵生產(chǎn)的最主耍因素有3個:生產(chǎn)菌種、培養(yǎng)成分和發(fā)酵工藝參數(shù)。1.1生產(chǎn)菌種的選育生產(chǎn)菌種的特性,是液體發(fā)酵生產(chǎn)中決定生產(chǎn)周期和生產(chǎn)水平的最重要因素。從自然界分離得到的靈芝菌，依靠自身代謝調(diào)控，趨向于平衡生長和繁殖，生長速度慢，不能滿足大規(guī)模工

4、業(yè)化生產(chǎn)的需耍。為此,通過人工的靈芝菌種選育，打破靈芝的正常代謝調(diào)控，使其快速生長并大量積累目標代謝產(chǎn)物就顯得尤為重要。1.2培養(yǎng)基的優(yōu)化培養(yǎng)基組成是靈芝發(fā)酵控制過程屮最基本的因素，對靈芝生物量乃至最終代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生可起決定性的作用。培養(yǎng)基中包括碳源、氮源、無機鹽和維生素等營養(yǎng)物質(zhì)，常見的碳源有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、淀粉、玉米粉等。一般認為單糖（如葡萄糖），可直接被靈芝菌絲體吸收，對菌絲體生長和多糖生成最為有利。常見的氮源有硫酸按、氯化按、硝酸錢、酵母膏、蛋白陳、豆餅粉、鼓皮等。有機氮源比無機氮源更能促進靈芝菌絲體的生長，因而靈芝發(fā)酵大都采用有機氮源。1.3發(fā)酵條件的控制確

5、定優(yōu)良的靈芝菌種和適宜的培養(yǎng)基之后，還需要有最佳的發(fā)酵條件,靈芝才能快速生長并積累目標代謝產(chǎn)物。發(fā)酵過程中主要控制的參數(shù)有培養(yǎng)溫度、pH條件、接種量、溶氧及發(fā)酵罐攪拌速度等等。-般培養(yǎng)靈芝的適宜pH范圍為5.0-6.5,但針對不同產(chǎn)物生產(chǎn)的最適初始pH并不相同。接種量對靈芝菌絲的生長有較大影響，一般認為接種量過低吋，菌絲生長速度慢，會延長發(fā)酵周期;而接種量過高則菌絲老化快，不利于有效物質(zhì)的積累。2靈芝多糖的分離提取及結(jié)構(gòu)分析2.1靈芝多糖的提取純化對于食用菌多糖的分離提取，其基本的工藝都差不多，都是利用多糖易溶于熱水而不溶于有機溶劑的性質(zhì)進行提取的。通過熱水浸提和乙醇沉淀得到的粗多糖常

6、含有色素、低聚糖和蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。蛋白質(zhì)可通過SeVage法、三氯乙酸法、蛋白酶法等來脫除，色素一般用過氧化氫或者活性炭進行脫色,低聚糖和單糖等小分子物質(zhì)可通過透析、超濾等方法去除。除去色素、低聚糖和蛋白質(zhì)等雜質(zhì)后的多糖提取液常常是多糖混合物,可用離子交換色譜法和凝膠色譜法等進一步分離純化，以得到純化的不同多糖組分。2.2靈芝多糖的分子結(jié)構(gòu)靈芝多糖是一種混合物，目前己分離到的有200多種，有水溶性多糖、水不溶性多糖、酸性多糖和堿性多糖等。靈芝多糖以雜多糖為主，主要含有以下單糖:D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、D-甘露糖、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、L-巖藻糖等。大部分的靈芝多糖以B-(1

7、-3)糖普鍵為主鏈，B-(1-6)及3-(1-4)為側(cè)鏈，其側(cè)鏈數(shù)目大小不一，組成側(cè)鏈的糖基成分復雜。多糖鏈由三股單糖鏈構(gòu)成，是一種螺狀立體構(gòu)形物,其立體構(gòu)形和DN/、RNA相似,螺旋層之間主要以氫鍵固定，分子量從數(shù)百到數(shù)十萬。3靈芝多糖的生物學活性3.1抗腫瘤活性靈芝及其所含多糖在體內(nèi)對小鼠移植性腫瘤有抑制作用，但對體外培養(yǎng)的腫瘤細胞無直接抑制作用。而且靈芝多糖能顯著增強機體免疫功能，如增強NK細胞的細胞毒活性以及促進細胞因子如IL-1.I