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《實驗報告---大孔樹脂分離純化杜仲綠原酸.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、大孔樹脂分離純化杜仲綠原酸的研究一、實驗?zāi)康?.1熟練掌握如何對大孔樹脂進行預(yù)處理。1.2了解大孔樹脂對綠原酸的吸附效果。二、原理綠原酸(Chlorogenicacid)是由咖啡酸(Cafeicacid)與奎尼酸(Quinicacid)組成的縮酚酸，異名咖啡單寧酸，化學(xué)名：3一D-咖啡酰奎尼酸(3-0．Cafeoylquinicacid)，分子式：C16H18O9，分子量：354．30，是植物體在有氧呼吸過程中經(jīng)莽草酸途徑產(chǎn)生的一種苯丙素類化合物。綠原酸是一種重要的生物活性物質(zhì)，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利膽、抗腫瘤、降血壓、降血脂、清除自由基和興奮
2、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用I1J。它是許多中藥材的有效成分之一，又是某些成藥的質(zhì)量指標。綠原酸應(yīng)用非常廣泛，主要為醫(yī)藥、日用化工和食品等行業(yè)。綠原酸在各類植物中的存在相當普遍，但含量較高的植物并不多見。近年的研究表明，杜仲葉綠原酸含量豐富，可達1％一5％。我國杜仲林種植廣泛，每年可產(chǎn)杜仲葉幾百萬噸，這為提取綠原酸提供了充足的原料基礎(chǔ),因此,從杜仲葉中分離提取綠原酸具有重要的意義大孔樹脂具有選擇性好、吸附量大、效率高、易洗脫、再生和成本低,特別適用于水溶性化合物的分離純化等優(yōu)點,在生物堿、皂甙、黃酮、多糖等的純化中已有應(yīng)用，并取得了顯著的效果。大孔樹脂種類較多,極性不
3、同,吸附性能各異。本實驗以以綠原酸為吸附質(zhì),分別采用靜、動態(tài)吸附和洗脫實驗等方法考察了樹脂對綠原酸的吸附性能,篩選出對綠原酸吸附、分離性能好的大孔樹脂,并得出吸附洗脫的最佳工藝參數(shù),為工業(yè)化分離提取綠原酸創(chuàng)造了條件。三、試劑與儀器3.1材料與試劑：綠原酸粗品；乙腈為色譜純試劑，磷酸、甲醇、乙醇等試劑均為分析純；NaOH固體，HCl溶液，聚酰胺樹脂，大孔樹脂，檸檬酸。3.2主要儀器：高效液相色譜儀，分析天平，10ml、25ml、50ml、100ml容量瓶，滴定管，1ml、2ml、5ml的移液管。，DZF-6050型真空干燥箱，恒溫水浴振蕩器，磨口三角瓶，培養(yǎng)皿
4、，恒流泵，玻璃吸附柱<6.0×60cm，鐵架臺，紫外分光光度儀，比色皿；擦鏡紙；注射器，燒杯，玻璃棒，洗耳球。漏斗，定性濾紙，標簽紙。四、實驗步驟4.1高效液相色譜所測的杜仲綠原酸粗品含量準確稱取綠原酸粗品1.153g置50mL棕色容量瓶中,加60%甲醇適量,超聲溶解并稀釋至刻度,搖勻,準確移取0.5mL置50mL棕色容量瓶中,用60%甲醇溶解并稀釋至刻度,得綠原酸溶液備用。4.2樹脂篩選4.2.1樹脂的預(yù)處理各種大孔樹脂分別用去離子水溶脹、浮選24h后,在1mol/LNaOH溶液中浸泡4h,用去離子水洗至中性;然后在0.5mol/LHCl溶液中浸泡24h,
5、用去離子水洗至中性;再在70%的乙醇水溶液中浸泡24h,不斷攪拌,用去離子水洗至無白色渾濁現(xiàn)象,無乙醇味后,用去離子水浸泡待用。將聚酰胺樹脂用95%的乙醇溶液浸泡24h用去離子水洗至無乙醇味后,再用4%的NaOH溶液浸泡24h,濾掉上層堿液，用去離子水洗至中性;然后用4%的檸檬酸溶液浸泡24h,再用去離子水洗至中性，用去離子水浸泡待用。4.2.2各種樹脂靜態(tài)吸附性能比較 選用7種樹脂(NKA-Ⅱ、NKA-9、FL-1、S-8、FL-3、B2、聚酰胺)測定靜態(tài)吸附量、吸附率并進行篩選。準確稱取經(jīng)預(yù)處理好的樹脂2g,裝入150mL的磨口三角瓶中,準確加入100m
6、l的杜仲提取液,蓋緊瓶塞,在(25±0.5)℃的恒溫水浴振蕩器上振搖24h。充分吸附后過濾,測定吸附液中綠原酸的濃度,按下式計算吸附量Q(mg/g)和吸附率E(%)Q=(C0–Ce)×V/W,E=(C0–Ce)/C0式中,C0為吸附液中綠原酸的初始濃度(mg/mL);Ce為吸附后綠原酸的剩余濃度(mg/mL);V為吸附液體積(mL);W為樹脂重量(g)。4.2.3各種樹脂靜態(tài)脫附性能比較 7種樹脂對綠原酸吸附完全后,一般可以使用甲醇、乙醇、丙酮等溶劑作為洗脫劑,但丙酮易揮發(fā)、難回收,使工業(yè)化生產(chǎn)成本增加,所以通常選用甲醇作為洗脫劑。取上述吸附飽和的樹脂，精密
7、加入90ml50%的甲醇溶液，在25-05℃下于恒溫水浴振蕩器上振蕩24h，過濾，計算解吸率：解吸率(％)=C1V1【(Co一Ce)×V】x100％式中：Cl表示解吸液中綠原酸的濃度(mg／mL)；V1表示解吸液的體積(ml)；Co、Ce、V意義同前。4.3樹脂吸附、脫附的條件篩選出最佳樹脂后，變換條件，得出其對吸附、脫附效果的影響。4.3.1不同pH值對吸附效果的影響選用最佳樹脂，在其他條件都相同，只有吸附液的pH不同的情況下，在pH為1、2、3、4、5、6、7時，判斷不同pH值對吸附效果的影響，繪制相應(yīng)的曲線，選出最佳pH值4.3.2不同濃度的洗脫劑對洗
8、脫效果的影響選用吸附完全的樹脂，在其他條件都相同，只
