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《大鼠肝卵圓細胞增殖模型的建立和體外分離的實驗研究△-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在應用文檔-天天文庫。
1、中國普外基礎與臨床雜志2013年10月第20卷第10期ChinJBasesClinGeneralSurg，Vo1．20，No．10，Oct．2013論著大鼠肝卵圓細胞增殖模型的建立和體外分離的實驗研究△黃欽賢，李海洋，胡毅‘，宋建寧，董標，曹坤【摘要】目的探討以2．乙酰氨基芴(2一AFF)灌胃與2／3肝切除法聯合運用建立大鼠肝卵圓細胞增殖模型的適宜劑量，并探討肝卵圓細胞的體外分離培養(yǎng)方法。方法將174只Wistar大鼠隨機分為4個實驗組(各30只)、未處理組(24只)和生理鹽水組(30只)。4個實驗組大鼠分別給予5、10、15及20mg／(kg·d)2-AAF灌胃(分別對應第1、2、3
2、及4實驗組)，于第5天行2／3肝切除，術后繼續(xù)灌胃至處死大鼠；生理鹽水組大鼠以生理鹽水灌胃，其余操作同實驗組；未處理組大鼠不做任何處理。6組分別于肝切除術后第4、8、12及16天各隨機處死6只大鼠。取肝組織行HE染色和免疫組化染色，觀察肝卯圓細胞的增殖情況[第4天時同時檢測血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉移酶(AST)水平]；并采用二步膠原酶灌注結合Percoll密度梯度離心法對大鼠肝卵圓細胞進行分離和培養(yǎng)。結果肝切除術后第4天，未處理組、生理鹽水組、第1、2、3及4實驗組大鼠的存活率分別為100％(24／24)、93％(28／30)、93％(28／30)、90％(27／
3、30)、90％(27／30)及80％(24／30)。肝切除后第4天，與未處理組及生理鹽水組比較，第2、3和4實驗組大鼠的血清ALT及AST水平均升高(尸<0．05)。HE染色結果顯示，第2、3及4實驗組大鼠的肝組織均出現不同程度的肝損傷，其中第3和第4實驗組均可見明顯的肝卵圓細胞增殖反應；免疫組化染色結果顯示，第2、3及4實驗組卵圓細胞標志6(OV-6)表達陽性細胞數在術后第4、8、及12天，隨2-AAF劑量的增加逐漸升高，與2-AAF間呈劑量嫩應關系(P<0．05)。大鼠肝卵圓細胞進行體外分離和培養(yǎng)后，經OV-6免疫組化染色鑒定，有80％的細胞表達呈陽性。結論聯合運用15mg／(kg
4、·d)2-AFF灌胃加2／3肝切除，于術后第l2天，有效誘導了肝卵圓細胞的增殖，且造模大鼠的耐受性較好、死亡率低。采用二步膠原酶灌注結合Percoll密度梯度離心法較成功地分離出了大鼠肝卵圓細胞?！娟P鍵詞】肝卵圓細胞；2一乙酰氨基芴；增殖模型；分離；體外；大鼠【中圖分類號】R657．3【文獻標志碼】AExperimentalStudyonEstablishmentofCellProliferationModelandIsolatedMethod／nVitroofHepaticOvalCellsinAdultRatHUANGQin-xian，LIHai-yang，HUM，SONGJian
5、—ning’，DONGBiao，CAOKun’．*DepartmentofHepatobiliarySurgery，AfiliatedHospitalofGuiyangMedicalUniversity，Guiyang550004，GuizhouProvince，ChinaCorrespondingAuthor：LIHai-yang，E—mail：haiyang_li@sina．com[Abstract]ObjectiveToexploretheproperdosageofestablishmentofstablehepaticovalcells(HOC)prolif-erationm
6、odelbyusing2-acetaminofluorene(2一AAF)combinedwithtwo—thirdpartialhepatectomy(2／3PH)surgery．andtoexploreisolatedandculturedmethodofHOCinvitro．MethodsThe174Wistarratswererandomlydividedinto4experimentalgroups(eachgroupenrolled30rats)，salinegroup=30)，anduntreatedgroup(n=24)．Ratsof4experi—mentalgrou
7、pswereunderwentgavageof5，10，15，and20mg／(kg‘d)2-AAF，correspondingtothegroupsfromNo．1toNo．4group．Ratsofsalinegroupreceivedsalinegavageandratsofuntreatedgroupdidn’treceivedanytreatment．Astandard2／3PHsurgerywasperformedonthe5day
