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1、·預(yù)防醫(yī)學(xué)·中國現(xiàn)代醫(yī)生2014年4月第52卷第12期沙門菌屬stn基因LAMP在食品衛(wèi)生檢驗(yàn)中的應(yīng)用王勝啟馬艷艷李。靜張勤河南出入境檢驗(yàn)檢疫局保健中心,河南鄭州450003【摘要】目的評(píng)價(jià)LAMP在食品衛(wèi)生沙門菌屬檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果。方法選擇145份食品標(biāo)本,采用LAMP方法和分離培養(yǎng)法進(jìn)行檢測(cè),比較兩種檢測(cè)方法的陽性率。結(jié)果LAMP陽性率為12.4%,分離培養(yǎng)法陽性率為6.2%。兩種方法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義<0.05)。兩種方法的陽性符合率為77.8%,陰性符合率為91.9%。結(jié)論LAMP法用于食品衛(wèi)生沙門菌屬的檢驗(yàn),具有快速、方便、陽性率高等優(yōu)點(diǎn)?!娟P(guān)鍵詞】沙門茵屬;環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增;分
2、離培養(yǎng);食品衛(wèi)生檢驗(yàn)【中圖分類號(hào)】R155.5[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1673—9701(2014)12一O114—02ApplicationofsalmonellastnLAMPinsanitaryinspectionoffoodstufsWANGShengqiMAYanyanLIJingZHANGQinHenanInternationalTravelHealthCareCenter,EntryandExitInspectionandQuarantineBureauofHenanProvince,Zhengzhou450003,China【Abstract]ObjectiveToev
3、aluateapplicationofsalmonellaLAMPinsanitaryinspectionoffoodstuffs.MethodsSe—lected145foodsamplesweredetectedbyLAMPandseparatedcuhivationmethod.Positiveratewascompared.ResultsPositiverateofLAMPwas12.4%.a(chǎn)ndthatofseparatedcultivationmethodwas6.2%.Therewassignificantdifference<0.05).Positivecoincidenc
4、erateoftwomethodswas77.8%,andnegativecoincidenceratewas91.9%.ConclusionSalmonellaLAMPforsanitaryinspectionoffoodstuffsshowsrapid,convenience,highpositiverate.【Keywords】Salmonella;LAMP;Sanitaryinspectionoffoodstuffs在世界各國的種類細(xì)菌性食物中毒中,沙門菌引1.2檢測(cè)方法起的食物中毒常列榜首[1]。我國已發(fā)現(xiàn)的血清型有2161.2.1標(biāo)本前增菌將收集到的標(biāo)本取25g,裝入無菌個(gè)。傳
5、統(tǒng)對(duì)沙門菌的檢測(cè)主要有分離培養(yǎng)方法,雖然均質(zhì)袋中,拍擊式均質(zhì)器拍打2rain,37℃培養(yǎng)10h。準(zhǔn)確但是程序繁瑣,而免疫學(xué)方法的敏感度相對(duì)較冷凍食品在45℃下解凍15min。低,PCR等敏感度和特異度均較高。但是設(shè)備要求1.2.2分離培養(yǎng)法將增菌后的145份標(biāo)本取1mL.較高,在基層不容易推廣應(yīng)用口一。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法接種于10mL的1TrB增菌液中,42%培養(yǎng)24h。另取(LAMP)是一種全新的核酸擴(kuò)增方法,具有簡(jiǎn)單、快1mL。接種于10mL的SC增菌液中,37℃培養(yǎng)24h。速、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)[41。本研究比較環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法分別取增菌液1環(huán),接種于BS平板和XLD平板,檢測(cè)食品標(biāo)本沙門
6、菌屬與分離培養(yǎng)法的一致性,探討37℃培養(yǎng)24h。取可疑菌落3個(gè),接種于TSI、營(yíng)養(yǎng)瓊其在食品衛(wèi)生檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值,現(xiàn)報(bào)道如下。脂平板和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)24h。對(duì)于生化反應(yīng)初步符合沙門菌特征的,從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平1材料與方法板上取可疑菌落,生理鹽水制成菌懸液。在微生物鑒1.1一般材料定系統(tǒng)上進(jìn)行分析。如果BS平板及XLD平板上無可2013年6—8月選擇145份食品標(biāo)本,其中冷凍疑菌落,BS平板37℃繼續(xù)培養(yǎng)24h,如果仍無可疑菌生肉20份,生鮮肉2O份,熟肉20份,非發(fā)酵豆制品落則為陰性。20份,速凍米面20份,生水產(chǎn)品l0份,冰激凌101.2.3LAMP檢測(cè)方法取標(biāo)本前增菌液1
7、mL,離心,份,沙拉10份,鮮榨果汁10份,生食類蔬菜5份。陽10000r/min,2min,棄上清,提取核酸,另取1L上性控制菌株:腸炎沙門菌。清液,制作待檢模板DNA。引物由百壹星辰(北京)生物科技有限公司提供。檢測(cè)145份標(biāo)本DNA。反應(yīng)結(jié)【基金項(xiàng)目】國家質(zhì)檢總局科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012IK227)CHINAMODERNDOCTORVo1.52No:12April2014中國現(xiàn)代醫(yī)生2014年4月第52卷第12期·預(yù)