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《細(xì)菌生物學(xué)檢驗基本技術(shù)ppt課件.ppt》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、細(xì)菌生物學(xué)檢驗技術(shù)TextTextText第一節(jié)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查講授內(nèi)容顯微鏡的使用細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查方法細(xì)菌的基本形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)觀察顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡（lightmicroscope）暗視野顯微鏡（dark-fieldmicroscope）相差顯微鏡（phasecontrastmicroscope）普通光學(xué)顯微鏡用油鏡放大1000倍，一般細(xì)菌均能清楚看到。暗視野顯微鏡用于檢查不染色的活細(xì)菌和螺旋體的形態(tài)及運動觀察。相差顯微鏡主要用于檢查不染色活細(xì)菌的形態(tài)及某些內(nèi)部結(jié)構(gòu)。普通光學(xué)顯微鏡暗視野顯微鏡倒置相差顯微鏡顯微鏡油鏡的使用(一)低倍鏡對光，將光線調(diào)至最強(qiáng)程度
2、(聚光器提高，光圈全部開放)。轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使鏡筒上升，滴香柏油1小滴(不要過多，不要涂開)于接物鏡正下方標(biāo)本上。轉(zhuǎn)動接物鏡轉(zhuǎn)換盤，使油鏡頭于鏡筒下方。俯身鏡旁側(cè)面在肉眼的觀察下，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使油鏡頭徐徐下降浸入香柏油內(nèi)，輕輕接觸玻片為止。顯微鏡油鏡的使用(二)慢慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，使油鏡頭徐徐上升至見到標(biāo)本的物象為止。轉(zhuǎn)動微調(diào)節(jié)器，使視野物象達(dá)到最清晰的程度。左手徐徐移動推進(jìn)器，并轉(zhuǎn)動微調(diào)節(jié)器以觀察標(biāo)本。標(biāo)本觀察完畢后，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器將鏡筒升起，取下標(biāo)本玻片。立即用擦鏡紙將鏡頭上的香柏油擦凈。顯微鏡的保護(hù)(一)顯微鏡在從木箱中取出或裝箱時，右手緊握鏡臂，左手穩(wěn)托鏡座，
3、輕輕取出。不要只用一只手提取，以防顯微鏡墜落，然后輕輕放在實習(xí)臺上或裝入木箱內(nèi)。顯微鏡放到實習(xí)臺上時，先放鏡座的一端，再將鏡座全部放穩(wěn)，切不可使鏡座全面同時與臺面接觸，這樣震動過大，透鏡和微調(diào)節(jié)器的裝置易損壞。顯微鏡的保護(hù)(二)顯微鏡須經(jīng)常保持清潔，勿使油污和灰塵附著。如透鏡部分不潔時，用擦鏡紙輕擦，如有油污，先將擦鏡紙蘸少許二甲苯拭去。顯微鏡用完后，取下標(biāo)本片，經(jīng)聚光器降下，再將物鏡轉(zhuǎn)成“八”字形，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使鏡筒下降，以免接物鏡與聚光器相碰。細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查方法不染色檢查法染色檢查法負(fù)染色法（一）不染色標(biāo)本檢查應(yīng)用：主要用于觀察活菌的動力和運動方式。常用方法
4、：壓滴法、懸滴法、暗視野映光法。1、壓滴法載玻片細(xì)菌懸液蓋玻片2、懸滴法鏡檢蓋玻片細(xì)菌懸液凹玻片染色檢查法細(xì)菌標(biāo)本經(jīng)染色后，除能清楚看到細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列方式外，還可根據(jù)染色反應(yīng)將細(xì)菌進(jìn)行分類。染色檢查法常用染料染料分天然染料和人工染料。依據(jù)助色基解離后的帶電情況，要將染料分為堿性和酸性兩種。堿性染料常以氯化物的形式存在，電離后帶正電荷。如美蘭、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等。酸性染料電離后帶負(fù)電荷。如伊紅、剛果紅等。染色檢查法染色的一般原理和程序細(xì)胞壁通性學(xué)說：與肽聚糖結(jié)構(gòu)有關(guān)?；瘜W(xué)學(xué)說：與細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中核糖核酸鎂鹽有關(guān)。等電點學(xué)說：與細(xì)菌所帶電荷有關(guān)。染色檢查法染色的
5、一般原理和程序染色材料準(zhǔn)備→涂片制備→染色。染色材料準(zhǔn)備要注意染液配制、玻片處理、標(biāo)本采集等幾個環(huán)節(jié)。涂片制備是在玻片上制備菌膜的過程。通常是用接種環(huán)將細(xì)菌涂成1cm~2cm大小菌膜，待自然干燥后經(jīng)固定處理再行染色。染色是增加被染物折光性過程。根據(jù)形態(tài)學(xué)檢查要求可將染色法分為單染色法和復(fù)染色法。涂片干燥固定染色水洗、吸干鏡檢制備涂片標(biāo)本→染色固定固定的目的在于：①殺死細(xì)菌。②使細(xì)胞物質(zhì)凝固和增加細(xì)菌通透性。③使菌膜較牢固地固定于玻片上，避免其在染色過程中脫落。固定可采用加熱法、凍干法、和化學(xué)法。堿性美藍(lán)液和石炭酸復(fù)紅液單染色法【染液】堿性美藍(lán)液、石炭酸復(fù)紅液【方
6、法】將上述某種當(dāng)液覆蓋于菌膜上，常溫染1min~3min，水洗，待干或吸水紙印干，鏡檢。【結(jié)果】菌體呈藍(lán)色或紅色。單染色法常用復(fù)染色方法革蘭氏染色法抗酸染色法異染顆粒染色法莢膜染色法芽孢染色法鞭毛染色法染色涂片保存法革蘭染色（Gramstain）最經(jīng)典、最常用的染色方法。通過革蘭染色將所有細(xì)菌分為G+菌和G-菌兩大類。革蘭氏染色的步驟1.涂片2.初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面1分鐘，后水洗。4.脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進(jìn)行脫色約15－20秒，后立即用
7、流水沖洗。5.復(fù)染：滴加番紅染色液，染3－5分鐘，水洗后用吸水紙吸干。6.鏡檢：觀察染色結(jié)果并繪圖。革蘭染色結(jié)果紫色－－革蘭陽性菌紅色－－革蘭陰性菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌影響革蘭染色的因素操作因素涂片的厚薄；脫色時間的長短。染液因素盧戈碘液放置時間過長；95％乙醇揮發(fā)；結(jié)晶紫與草酸銨混合時間太長。細(xì)菌因素細(xì)菌種類；細(xì)菌菌齡等。革蘭氏染色法鑒別細(xì)菌抗酸染色法抗酸染色法是用于區(qū)分混合標(biāo)本中分枝桿菌屬細(xì)菌（如結(jié)核桿菌、麻風(fēng)桿菌）的鑒別染色方法?！驹怼客暾种U菌中含有分枝菌酸，能在加熱條件下與滲入細(xì)胞內(nèi)石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合，其細(xì)胞壁有阻止染料脫出作用。因此能抵抗鹽酸酒精
8、脫色使菌體染成紅色，稱抗
