細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù)ppt課件.ppt

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1、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù)1許欣第一節(jié)樣本的采集與送檢在公共衛(wèi)生及預(yù)防醫(yī)學(xué)領(lǐng)域所涉及的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)樣本種類繁多，包括來自食品、化妝品、涉水產(chǎn)品、消毒及衛(wèi)生用品、環(huán)境及物品（水、土壤、空氣，各種物品）、正常人體及臨床等的樣本。一、臨床樣本的采集與送檢（一）血及骨髓樣本的采集1.采樣時(shí)間：發(fā)熱期、用藥之前、病情發(fā)展2.采樣部位及頻率：多部位、高頻率3.樣本采集的量：成人血量10ml，嬰兒1ml～2ml，兒童3ml～5ml；當(dāng)懷疑為真菌感染時(shí)，應(yīng)采集雙份量，分別作雙相培養(yǎng)(37℃/28℃)。骨髓1ml～2ml。4.樣本的送檢：盡快，室溫

2、5.注意事項(xiàng)：同時(shí)需氧和厭氧培養(yǎng)一、臨床樣本的采集與送檢（二）尿液樣本的采集1.采樣時(shí)間：晨尿、用藥前2.采樣方法：10ml，中段尿、腎盂尿、導(dǎo)尿3.注意事項(xiàng)：無菌操作，用藥前（三）糞便樣本的采集1.采樣時(shí)間：急性期、新鮮糞便2.采樣方法：自然排便、直腸拭子、Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基或pH7.0的甘油PBS3.注意事項(xiàng)：無菌操作、可能厭氧培養(yǎng)一、臨床樣本的采集與送檢（四）痰及上呼吸道樣本的采集1.采樣時(shí)間：晨痰、鼻咽拭子2.采樣方法：自然咳痰法、支氣管鏡采集法、胃內(nèi)采痰法、氣管穿刺法等；咽拭子3.注意事項(xiàng)：先漱口、結(jié)核分枝桿

3、菌和真菌可4℃保存一、臨床樣本的采集與送檢（五）其它臨床樣本化膿和創(chuàng)傷樣本：棉拭子腦脊液、膽汁、胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液和鞘膜液等：穿刺生殖道：棉拭子組織樣本：內(nèi)鏡炎癥或組織壞死部位：手術(shù)二、食品衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)樣本（一）樣品采集原則注意代表性，防止樣品受污染、變質(zhì)和細(xì)菌生長大樣(一整批)、中樣(混合200g)和小樣(檢樣25g)（二）樣品采集方法無菌用具、包裝完好、混合、震搖、冷凍、冷藏（三）采樣的數(shù)量根據(jù)食品種類的不同，采樣的數(shù)量也應(yīng)不同（四）注意事項(xiàng)3h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室，無菌操作三、化妝品細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)樣本（一）采樣數(shù)量每批兩個(gè)大包裝

4、抽取4個(gè)包裝，10g或10ml（二）樣本的處理1.液體樣品：10倍稀釋，油性物用液體石蠟、土溫-802.膏霜乳劑樣品：親水性-玻璃珠，疏水性-先行乳化3.固體樣品的處理：均質(zhì)后取上清液（三）樣品送檢原則及注意事項(xiàng)1.維持樣品污染原狀（出廠污染狀態(tài)）2.去除殘留防腐劑及抑菌劑（吐溫-80和卵磷脂）3.注意事項(xiàng)（室溫存放，多項(xiàng)目時(shí)先做微生物）四、生活飲用水細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)樣本（一）水樣采集許多水體隨時(shí)間和空間會(huì)發(fā)生很大變化，要采集具有代表性的樣品，必須定出合理的采樣規(guī)劃。（二）采樣點(diǎn)的選擇注意樣品的代表性，河水、湖水、地下水、自來水（三）采

5、樣器具采樣瓶、自動(dòng)采樣器、容器可加硫代硫酸鈉（四）樣品送檢及注意事項(xiàng)4h內(nèi)檢驗(yàn)、可冷藏五、消毒及衛(wèi)生用品（一）醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)消毒及衛(wèi)生用品物表：5cm×5cm滅菌規(guī)格板，100cm2區(qū)域空氣：高度150cm、距墻100cm；面積≤30m2，設(shè)一條對(duì)角線上內(nèi)、中、外3點(diǎn)；面積＞30m2，設(shè)4角及中央5點(diǎn)，暴皿5min；或用采樣器手/皮膚粘膜：含中和劑棉拭子，5cm×5cm規(guī)格板醫(yī)療用品：破壞、棉拭子消毒劑：1ml加至9ml中和劑中五、消毒及衛(wèi)生用品（二）一次性使用的衛(wèi)生用品同一批號(hào)3個(gè)運(yùn)輸包裝中至少隨機(jī)抽取12個(gè)最小包裝量；1/4用于

6、檢測、1/4用于留樣、2/4就地封存準(zhǔn)備復(fù)測。六、空氣樣本平板沉降法和采樣器采集法（一）空氣微生物采樣器分類按照采樣方式的不同可分為兩類(Ⅰ和Ⅱ類)，Ⅰ類是將微生物直接采到固體培養(yǎng)基上(如Andersen采樣器)，Ⅱ類是把微生物先采到液體或其它介質(zhì)上，再轉(zhuǎn)種到培養(yǎng)基或細(xì)胞上顯示(如Porton采樣器)。六、空氣樣本按照流量的有效數(shù)字分，3位數(shù)以上為大流量(≥500L/min)，2~3位數(shù)為中流量(499L/min～11L/min)，1位數(shù)為小流量(≤10L/min)。按照采樣器所用介質(zhì)性質(zhì)又可分為固體及液體采樣器。按采樣器的工作原

7、理可分為六種：撞擊式、沉降式、過濾式、靜電吸附式、旋風(fēng)式和離心撞擊式采樣器。六、空氣樣本（二）空氣中細(xì)菌等微生物采樣的介質(zhì)采樣介質(zhì)(包括培養(yǎng)基)對(duì)細(xì)菌等微生物具有支撐、黏附、保護(hù)和生長作用。常用有凡士林、聚硅酮，氧化烯二十二烷酮(OED)和SGB(糖、甘油、牛血清白蛋白)（三）空氣中細(xì)菌等微生物采樣方法及送檢1.平板沉降法：參見醫(yī)院空氣采樣規(guī)定。2.空氣采樣器采樣：常用Andersen采樣器第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)檢查法了解標(biāo)本中有無細(xì)菌及其大致的數(shù)量。驗(yàn)證培養(yǎng)物是否為純種。形態(tài)檢查結(jié)果可做初步診斷。不染色檢查法和染色檢查法。借助顯微

8、鏡對(duì)形態(tài)、大小、排列、結(jié)構(gòu)的直接觀察。一、顯微鏡檢查1、普通光學(xué)顯微鏡(lightmicroscope)：分辨率0.2μm，用于細(xì)菌染色標(biāo)本的觀察。2、暗視野顯微鏡(dark-fieldmicroscope)：具有暗視野聚光器，用于觀察不染色標(biāo)本活