從活化酵母中提取葡聚糖的工藝研究

從活化酵母中提取葡聚糖的工藝研究

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1、從活化酵母中提取β-葡聚糖的工藝研究[摘要]筆者采用酸法、堿法和酸堿融合法提取酵母細胞壁中的β-葡聚糖,對得率和純度進行對比分析后,發(fā)現(xiàn)用堿法浸提工藝從破壁酵母中提取堿不溶性β-葡聚糖效率最高。通過正交試驗得出最佳提取條件為:在75°C條件下、0.75mol/L的堿液處理15min。不同脫水和干燥條件的對比實驗表明:脫水和干燥條件影響產(chǎn)品的色澤;溶劑和水分蒸發(fā)得越快,產(chǎn)品最終含水率越低,產(chǎn)品顏色越白。[關(guān)鍵詞]酵母細胞壁β-葡聚糖堿法酸法酸堿法0.引言β-葡聚糖作為活性多糖不僅具有免疫促進作用,而且具有抗癌、抗腫瘤、提高抗病能力和降低膽

2、固醇等生理活性,是一類研究較多的活性多糖。由于其具有高粘性、高持水性和熱穩(wěn)定性,以及制備工藝簡單等方面的優(yōu)點,在食品、醫(yī)學(xué)、化妝品、造紙和建筑材料等行業(yè)得以廣泛應(yīng)用。在國內(nèi)外相關(guān)研究報道中,對于β-葡聚糖的制備,有酸法,堿法,以及酸堿、有機溶劑和酶相結(jié)合的方法。其中,堿法由于其浸提工藝簡單,產(chǎn)品純度高,是從廢棄酵母中有效提取高純度β-葡聚糖的理想途徑。本文在對比酸法、堿法和酸堿法的基礎(chǔ)上,主要研究用堿法工藝提取β-葡聚糖的最佳條件,并分析不同提取條件對產(chǎn)物得率和純度的影響,以及干燥和脫水條件的選擇對結(jié)果的影響,為啤酒生產(chǎn)中的廢酵母泥利用

3、提供技術(shù)參考。1.材料與方法1.1材料和試劑酵母粉,乙酸,NaOH,無水乙醇,無水乙醚,硫酸等,均為分析純。1.2方法1.2.1酵母破壁鹽法破壁:在酵母菌體濃度10%,氯化鈉濃度2.5%,破壁時間2.5h,破壁溫度70℃的實驗條件下進行破壁。1.2.2酸法配制1.0mol/L醋酸溶液60mL,加入酵母粉3g,在70℃下水浴1-2小時。3000r/min離心15min,沉淀物水洗2次,然后用無水乙醇洗滌,無水乙醚脫水,在37℃條件下干燥至恒重。1.2.3堿法配制1.0mol/LNaOH溶液60mL,加入酵母粉3g,在70℃下水浴1-2小時

4、。3000r/min離心15min,沉淀物水洗2次,然后用無水乙醇洗滌,無水乙醚脫水,在37℃條件下干燥至恒重。1.2.4酸堿法4g酵母粉加適量水制成酵母泥,加入200mL1mol/LNaOH在90℃下,作用2h后3000r/min離心15min,水洗2遍,加入4%的乙酸溶液50mL室溫處理2h,3000r/min離心10min后,用無水乙醇和無水乙醚分別脫水兩次,在37℃下干燥12h至恒重。1.2.5堿法分離提取的最佳實驗條件表1堿法分離提純β-葡聚糖正交實驗采用堿法分離提純β-葡聚糖時,其得率和純度受多種因素影響,通過單因素試驗,初

5、步確定堿處理時間、堿處理溫度、堿液濃度為主要因素,進而通過正交實驗,確定堿法分離提純β-葡聚糖的最佳工藝條件。堿法分離提純β-葡聚糖正交實驗設(shè)計見表1,每個處理用2g酵母粉,60mLNaOH,通過正交試驗處理后,3000r/min離心15min,沉淀物水洗兩遍,用無水乙醇在75℃條件脫水1-2h,然后在干燥箱中干燥至恒重,記錄結(jié)果并分析。1.2.6葡聚糖含量測定用苯酚—硫酸法,在490nm處測定標準葡萄糖溶液在不同濃度(mg/mL)下的吸光度OD,以O(shè)D為縱坐標,標準葡萄糖濃度(mg/mL)為橫坐標繪制工作曲線。對所測樣品經(jīng)準確稱量后,

6、用H2SO4完全水解,加苯酚顯色,在490nm處測得各樣品的OD,然后通過工作曲線計算各樣品葡聚糖的含量。1.2.7脫水和干燥條件對產(chǎn)品色澤的影響將所得β-葡聚糖依次用不同量的無水乙醇和無水乙醚脫水,探討無水乙醇和無水乙醚用量對β-葡聚糖色澤的影響。將所得β-葡聚糖進行自然干燥和真空干燥,比較兩種干燥方法對β-葡聚糖色澤的影響。2.結(jié)果分析2.1酸法、堿法和酸堿法結(jié)果對比分析分別對三種不同工藝所得的產(chǎn)品進行計算得率:葡聚糖得率=葡聚糖(沉淀物)/酵母干重x100%。表2酸法、堿法和酸堿法的對比2.2正交試驗的結(jié)果表3堿法提取正交試驗結(jié)果

7、實驗號溫度/℃時間/min堿液濃度mol/L175150.50275300.75375601.00485150.75585301.00685600.507100151.008100300.509100600.75因素方法實驗條件實驗用料葡聚糖/g得率/%純度/%溫度/°C時間/min酸法7060-1201mol/L乙酸3g酵母粉0.76925.6341.22堿法75150.5mol/LNaOH2g酵母粉0.48624.3354.33酸堿法變溫2401mol/LNaOH4%乙酸4g酵母粉0.9122.7571.22實驗號粗葡聚糖/g純葡聚

8、糖/g得率/%純度/%10.4860.264024.3354.3320.39760.218119.8854.8530.24220.134812.1155.6540.44380.222922.1950.225

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