玻璃器具硅烷化.doc

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1、玻璃器具硅烷化一.實(shí)驗(yàn)原理玻璃表面存在硅醇基團(tuán)(Si-OH)，可對(duì)蛋白質(zhì)等樣品產(chǎn)生吸附，造成樣品損失。該類基團(tuán)可用硅烷化法進(jìn)行封閉處理，通過(guò)硅烷化試劑二甲基二氯硅烷或六甲基二硅胺與載體表面進(jìn)行反應(yīng)，除去該類基團(tuán)的氫鍵結(jié)合能力，以改善載體表面的性能，減少對(duì)樣品的吸附。在處理低濃度的特別“黏”的溶解物如單鏈核酸或蛋白質(zhì)時(shí)尤其重要。二.試劑器材-氯三甲基硅烷或二氯二甲基硅烷-真空泵-干燥器三.操作步驟方法一：1.配制含6%二甲基二氯硅烷的甲醇溶液(硅烷化劑)；2.將玻璃器皿洗凈(建議用重鉻酸鉀洗液浸泡清洗)、

2、干燥；3.在通風(fēng)櫥內(nèi)將硅烷化劑倒入玻璃器皿內(nèi)，使其接觸器皿內(nèi)表面并停留10sec以上。期間攪拌或振蕩可使硅烷化劑與玻璃的反應(yīng)更完全和均勻；4.倒去硅烷化劑，用甲醇洗去過(guò)量的硅烷化劑，將玻璃器皿自然晾干，然后100℃加熱1hr。方法二：1.在通風(fēng)櫥內(nèi)將要硅烷化的玻璃器具或儀器和裝有1-3ml氯三甲基硅烷或二氯二甲基硅烷的燒杯放入干燥器內(nèi)。氯三甲基硅烷和二氯二甲基硅烷蒸氣有毒性且高度易燃。也可用溶于易揮發(fā)的有機(jī)溶劑(如氯仿或庚烷)中的約5%的二氯二甲基硅溶液簡(jiǎn)要地沖洗，或浸透其中，有機(jī)溶劑蒸發(fā)使二氯二甲基硅

3、沉積在器具表面。1.將干燥器連接到真空泵上，直到硅烷開(kāi)始沸騰，關(guān)閉泵連接維持干燥器內(nèi)真空，直到液體硅烷揮發(fā)完畢(約1-3hr)2.在通風(fēng)櫥內(nèi)打開(kāi)干燥器，使硅烷蒸汽散掉。3.180℃烘烤玻璃器具或儀器2hr。一.注意事項(xiàng)：-二甲基二氯硅烷有毒，易揮發(fā)、易燃，使用時(shí)應(yīng)注意戴橡膠手套、工作服及防護(hù)鏡，并在防爆通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行；-二甲基二氯硅烷應(yīng)避光密閉保存。長(zhǎng)期存放會(huì)與水反應(yīng)，并可自發(fā)聚合，產(chǎn)生云霧狀沉淀而降低有效成分，可通過(guò)濾紙過(guò)濾除去多聚物；-玻璃器皿反應(yīng)前務(wù)必干燥，可用200℃干燥15min；-當(dāng)玻璃器皿重

4、新變得親水時(shí)表明硅烷化層已經(jīng)破壞，需要重新處理；-廢棄硅烷化劑的處置：在硅烷化劑中加入水，然后按一般可燃液體處置方法處理。