熒光衍生試劑在高效液相色譜和電泳中的應(yīng)用

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1、熒光衍生試劑在高效液相色譜和電泳中的應(yīng)用導師：張玉奎學生：張琳中科院大連化學物理研究所1810組引言常用熒光衍生化試劑應(yīng)用簡介展望匯報內(nèi)容衍生的目的衍生發(fā)應(yīng)方式熒光衍生試劑的構(gòu)成引言衍生化反應(yīng)方式在線(online)離線(offline)從衍生反應(yīng)的場所來分柱前衍生化(pre-columnderivatization)柱上衍生化(on-columnderivatization)柱后衍生化(post-columnderivatization)從是否與儀器聯(lián)機的角度來分從是否形成共價鍵來分標記非標記熒光衍生試劑的基本構(gòu)成取代基熒光團（試劑分子母體）反應(yīng)

2、基團膽磺酰肼DNS-HI胺類化合物的衍生試劑芳香鄰二醛類OPA異硫氰酸酯類FITC酰氯類FMOC活性鹵類NBD-ClN-羥基琥珀酰亞胺活性酯類AQC鄰苯二甲醛OPA4-氯-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑NBD-Cl熒光素異硫氰酸酯FITCFMOC芴代甲氧基酰氯6-氨喹啉基琥珀酰亞胺碳酸酯AQC常用胺的衍生試劑分子式鄰苯二甲醛OPA衍生分離氨基酸的色譜圖JChromatorgr.1990,499:557集成化微流控芯片氨基酸分析儀高等學校化學學報2004,25:189~190FMOC衍生分離氨基酸的色譜圖JChromatorgr.1990,499:

3、557FMOC與CEOC衍生分離氨基酸的比較Anal.Biochem2003,31317~27圖3CEOC衍生胺類化合物色譜分離圖（23種）圖2FMOC衍生胺類化合物色譜分離圖（23種）FMOC與CEOC衍生分離脂肪胺的比較II醇、酚的衍生試劑羰基氯類：FMOCCEOC磺酰氯類:DNs-Cl鹵代三嗪類:EDTN1-乙氧基-4-(二氯-三嗪)萘（EDTN）CEOC衍生醇類熒光檢測色譜分離分析化學2003,31,62~651.苯酚2.對氯苯酚3.2,5-二甲基苯酚4.2,4-二氯苯酚5.1,4對苯二酚CEOC衍生酚類熒光檢測色譜分離III羰基化合物的衍

4、生試劑肼類DNs-HCEOC-H氨基類氨基甲基芘肼和胺與羰基化合物的反應(yīng)1.乳糖2.甘露糖3.葡萄糖4.鼠李糖5.山梨糖(FLdetection)咔唑-9-乙氧基羰基肼(CEOC-H)柱前衍生中性糖高效液相色譜分離IV羧酸類化合物的衍生試劑溴甲基類BrMMC哌嗪基類DBD-Pz重氮甲烷基類ADAM其它類9-(2-羥乙基)-吖啶酮HEA4-氨甲基-6，7-二甲基香豆素(ADMC)7-N-哌嗪-4-二甲氨基苯并呋喃9-蒽重氮甲烷9-蒽重氮甲烷(4-溴甲基-7-甲氧基香豆素)熒光衍生試劑與羧酸的反應(yīng)4-氨甲基-6,7-二甲基香豆素(ADMC)衍生羧酸色譜

5、分離圖Anal.Sci.1996,12:189Fig.1膽汁酸分離色譜圖（熒光檢測）.衍生物的激發(fā)和發(fā)射波長分別為?ex=404,?em=440nm9-(2-羥乙基)-吖啶酮HEA衍生膽汁酸色譜分離圖V分離對映體的手性熒光衍生試劑ToshimasaToyo’okaJapanJ.C.A1998822215~224手性熒光衍生試劑R(-)DBD-PyNCS衍生分離DL氨基酸OPA與手性硫醇衍生分離DL氨基酸N-異丁酰基-D(L)-半胱氨酸(IBDC和IBLC)J.C.A1999832123VI蛋白質(zhì)的衍生試劑目前常用衍生蛋白質(zhì)的熒光標記試劑有：鄰苯二甲

6、醛(OPA)4-氟-7-硝基苯并惡二唑(NBD-F)熒光素異硫氰酸酯(FITC)3-呋喃甲酰喹啉-2-羰醛(FQ)鄰苯二甲醛OPA衍生馬心肌紅蛋白質(zhì)毛細管電泳分離Fig.5OPA柱后標記馬心肌紅蛋白質(zhì)毛細管電泳圖J.Am.Chem.Soc.1995,117:33253-呋喃甲酰喹啉-2-羰醛FQ衍生蛋白質(zhì)毛細管電泳分離J.Am.Chem.Soc.1989,111:5008VII核酸的衍生試劑DNA序列分析中所用的四種熒光衍生試劑Nature1986,327:674DNA測序儀及電泳圖展望分析化學中的有機試劑在分析化學中占有與分析儀器同等重要的地位，

7、熒光衍生化試劑則是有機分析試劑的一類重要分支。性能優(yōu)良的熒光衍生化試劑可能將成為某些物質(zhì)的高靈敏高選擇性分析的關(guān)鍵，熒光衍生試劑的開發(fā)與應(yīng)用也正朝這個方向發(fā)展。在實際工作中將可能遇到各種現(xiàn)有熒光衍生試劑所不能解決或不能很好解決的問題。有必要根據(jù)實際工作的需要來開發(fā)研究新型的熒光衍生試劑ThankYou!