檸檬酸產(chǎn)生菌的選育

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1、獷檸檬酸產(chǎn)生菌的選育上海新型發(fā)酵廠徐定邦李文通,。。檸檬酸發(fā)酵已有幾十年歷史文獻浩翰本文僅對菌種選育方法和成果作一介紹一產(chǎn)檸檬酸菌種的分布。關(guān)于產(chǎn)檸檬酸菌種的分布具有工業(yè)生產(chǎn)價值的菌株比較集中于黑曲霉和假絲酵母‘,?！?,字佐美檢測過一千多株黑曲霉其中一半以上菌株能產(chǎn)卜以上的檸檬酸阿部等,?！?檢測了一千多株從花蜜分離的酵母其中一百多株能產(chǎn)。一的檸檬酸和‘’,。各檢測了幾十株假絲酵每都能累積檸檬酸王分析了已鑒定的個屬,,的株酵母發(fā)現(xiàn)凡以芽殖方式繁殖的酵母容易累積檸檬酸而以其它方式繁殖的酵。,母不累積檸檬酸上述統(tǒng)計對于確定篩選方向很有幫助但是為什么

2、有些種屬的菌株容,,,易累積檸檬酸而另一些種屬菌株不累積檸檬酸至今所知甚少是一個尚待研究的問。題二誘變育種,,雖然從自然界篩選檸檬酸產(chǎn)生菌比較容易但產(chǎn)酸水平不高往往經(jīng)過誘變才得到。、、高產(chǎn)菌株已應用于檸檬酸育種的物理和化學誘變方法有紫外線射線一射、、、、、、、、線超聲波乙烯亞胺秋水仙素硫酸二乙醋亞硝酸甲纂磺酸乙釀氮氫亞硝?；鹊取?、。比較了用紫外線一丫射線氮氛和秋水仙素的效果對每一種誘變因子,、、分析了五百個菌落正變株產(chǎn)酸比親株高以上比例分別為,,。和但以用一,射線得到高產(chǎn)株產(chǎn)酸比親株高以上比例最高占”認為用亞硝基肌處理一小時存活率小于時得到穩(wěn)定

3、高產(chǎn)。,,株的比例較高認為用一,射線處理存活率的左右時得到高產(chǎn)株比。例較高,,要得到高產(chǎn)菌株往往要經(jīng)過多步誘變用氮氛誘變使產(chǎn)酸從增加到,,。又用一,射線誘變使產(chǎn)酸增加到再用紫外線誘變使產(chǎn)酸提高到。,,而使用一,射線經(jīng)三次誘變使產(chǎn)檸檬酸轉(zhuǎn)化率從逐步提高。?！?到還從一株轉(zhuǎn)化率只有左右的黑曲霉用紫外線和,射線誘變得到二,,。株突變株以蔗糖為碳源時產(chǎn)酸轉(zhuǎn)化率達供糖的和三初篩方法,。,為了減少搖瓶工作量可以在瓊脂平板中加人碳酸鈣根據(jù)透明圈大小進行。,、,初篩也可以在瓊脂平板中加入指示劑如嗅酚藝澳甲酚綠根據(jù)顯色圈大小進。,。,行初篩但是黑曲霉在瓊脂平板上的

4、蔓延生長影響了這種方法的使用效果二?1994-2010ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net,。,發(fā)明的紙片培養(yǎng)方法克服了這一缺點將濾紙浸漬含指示劑的培養(yǎng)基置于平皿,,,,內(nèi)將稀釋的抱子懸浮液接種于紙片上長出的單菌落相當緊密變色圈界限明顯變。,”色圈直徑與菌落直徑之比的大小與發(fā)酵時的產(chǎn)酸高低相當一致用這種方法從,,。萬個菌落中初篩株進行搖瓶試驗從中得到產(chǎn)酸比每株提高一倍的突變株‘”,,,復旦大學遺傳研究所等改進了接種方法

5、提高了效率較快選得了比原生產(chǎn)菌提高。,的突變株由于培養(yǎng)基中生理酸性鹽被利用后形成的無機酸及菌株分泌的其它有機酸,?！鶗怪甘緞╋@色故指示劑顯色法專一性很差以對二甲基氨基苯,,,。醛的醋醉溶液噴灑并于℃加熱僅檸檬酸顯明顯的紫色檢限為微克為了得,。到所需的菌種需在測試前先將菌落復制四菌落形態(tài)特征和產(chǎn)酸關(guān)系。關(guān)于黑曲霉菌落形態(tài)和檸檬酸產(chǎn)量之間的關(guān)系已累積了不少資料報導抱,。子顏色發(fā)生變化的一百多株突變株中一半以上是正變株發(fā)現(xiàn)小菌落變異。株的產(chǎn)酸可比親株提高倍受到很多人注意的是分生抱子形成的疏密和檸檬酸累?！病?,積能力的關(guān)系觀察到高產(chǎn)檸檬酸變異株往往

6、在麥芽汁斜面上培養(yǎng)一星期,,。,‘,日,以上時才形成稀疏的分生抱子而產(chǎn)酸低的親株僅三天就形成濃密的分生抱子指出在用發(fā)酵培養(yǎng)基配制的斜面上尤其容易顯示出分生抱子形成能力和累積檸檬酸能力。、之間的相應關(guān)系梁化成在描述他們的高產(chǎn)檸檬酸的菌株時都提到分生抱。。子稀疏這一特征黑曲霉形成分生抱子時需要活躍的完整的三叛酸循環(huán)分生抱子稀,。,疏可能正是由于細胞內(nèi)三叛酸循環(huán)微弱所致而三叛酸循環(huán)微弱特別是烏頭酸水合。酶和異檸檬脫氫酶失活是有利于檸檬酸累積的所以分生抱子稀疏和檸檬酸累積增加可,。能有一定內(nèi)在聯(lián)系值得加以應用和深入研究五曹養(yǎng)缺陷型突變株和產(chǎn)酸。、、甲硫氨

7、擴用亞硝基肌誘變用過濾富集法獲得了需組氨酸朧氨酸酸為生長。,。因子的營養(yǎng)缺陷型其產(chǎn)酸大多低于原養(yǎng)型親株個別與親株相近“用、、、甲基磺酸乙醋誘變得到了需尼克酸對氨基苯甲酸腺嘿吟胞喀嚨和各種氨基酸為生,,,長因子的營養(yǎng)缺陷型多數(shù)是負變株但有一株精氨酸缺陷型產(chǎn)酸比親株增加并發(fā),現(xiàn)凡是賴氨酸缺陷型均累積酮酸凡是添加生長因子后生長仍很微弱的菌株不累積檸檬。。酸而產(chǎn)生草酸和葡萄搪酸還得到過產(chǎn)酸比親株增加的營養(yǎng)缺陷型突變株,,檸檬酸經(jīng)烏頭酸水合酶催化轉(zhuǎn)變?yōu)楫悪幟仕峤?jīng)異檸檬酸脫氫酶催化分解為酮,,戊二酸然后通過谷氨酸脫氫酶作用生成谷氨酸所以烏頭酸水合酶和異檸檬酸

8、脫氫酶,。缺失菌株不能正常合成谷氨酸等已在酵每和細菌中發(fā)現(xiàn)有些谷氨酸缺,陷型是由于烏頭酸水合酶缺失這種谷氨酸缺陷型菌株能累積比原養(yǎng)型親株