牛奶中黃曲霉毒素m1常見(jiàn)檢測(cè)方法比較

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1、牛奶中黃曲霉毒素M1常見(jiàn)檢測(cè)方法比較　　摘要：黃曲霉毒素M1（AFM1）是動(dòng)物攝入黃曲霉毒素B1（AFB1）后在體內(nèi)經(jīng)羥基化形成的代謝產(chǎn)物，具有極強(qiáng)的毒性，存在于乳中。介紹了黃曲霉毒素M1（AFM1）的危害以及牛奶中黃曲霉毒素M1的薄層色譜（TLC）檢測(cè)法、高效液相色譜（HPLC）檢測(cè)法和快速檢測(cè)法，并比較了各種方法的優(yōu)缺點(diǎn)和適用范圍。關(guān)鍵詞：黃曲霉毒素M1；危害；檢測(cè)方法；比較中圖分類(lèi)號(hào)：TS252.7文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1007-273X（2013）06-0078-03黃曲霉毒素（Aflatoxin，AF）主要是黃曲霉菌和寄生曲霉菌的代謝產(chǎn)物，之所以廣受重視是因?yàn)樗侨祟?lèi)癌癥的一

2、個(gè)重要的致癌源。至今已分離出的黃曲霉毒素及其衍生物有20多種，在天然食物中以黃曲霉毒素B1最為多見(jiàn)。在AF中，已知毒性大小順序?yàn)锳FB1>AFM1>AFG1>AFB2>AFG。黃曲霉毒素M1（AflatoxinM1，AFM1）是動(dòng)物攝入黃曲霉毒素B1（AflatoxinB1，AFB1）后在體內(nèi)經(jīng)羥基化形成的代謝產(chǎn)物，毒性?xún)H次于AFB1，WHO將其列為ⅡB類(lèi)致癌物。AFM1主要存在于動(dòng)物的乳、腎臟、肝臟、蛋、肉和尿中，其中以乳中最為常見(jiàn)。把發(fā)霉的谷物作為飼料，其中的黃曲霉毒素在2410h之后就能進(jìn)入奶中。王蕾指出黃曲霉毒素被動(dòng)物食用后，一部分會(huì)蓄積在動(dòng)物的體內(nèi)，另外一部分則會(huì)轉(zhuǎn)化到乳汁和尿

3、液中，轉(zhuǎn)化率一般為3.45%～11.39%[1]，排出AFM1的量為AFB1攝入量的1%～3%[2]。1黃曲霉毒素M1的基本性質(zhì)及危害黃曲霉毒素基本結(jié)構(gòu)由一個(gè)二呋喃環(huán)和一個(gè)氧雜萘鄰?fù)M成，前者為其毒性結(jié)構(gòu)，后者可能與其致癌作用有關(guān)。黃曲霉毒素M1一旦產(chǎn)生便很難消除，因?yàn)樗鼘?duì)光、熱和酸都比較穩(wěn)定，熔點(diǎn)（裂解溫度）在299℃。牛奶常見(jiàn)的3種消毒方法都對(duì)它無(wú)可奈何。黃曲霉毒素M1進(jìn)入人或動(dòng)物體內(nèi)后，除抑制DNA、RNA合成外，也抑制肝臟蛋白質(zhì)合成，導(dǎo)致人體中毒。其危害主要表現(xiàn)在3個(gè)方面：損害組織器官；致癌、致畸、致突變，引發(fā)動(dòng)物及人類(lèi)的肝癌、腎癌和胃癌等[3-5]；抑制免疫機(jī)能。其毒性是氰化鉀

4、的10倍，砒霜的68倍，主要危害的部位在肝臟。2牛奶中AFM1的限量牛奶中AFM1限量取決于科學(xué)、社會(huì)和經(jīng)濟(jì)方面的諸多因素，這些因素相互影響、制約，綜合地決定牛奶中AFM1限量值。目前，世界各國(guó)對(duì)食品中AFM1的含量都制定出了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。牛奶中AFM1限量值采用0.0510μg/kg的國(guó)家最多，為34個(gè)，其中絕大部分國(guó)家是歐盟成員國(guó)以及與歐盟有貿(mào)易的非洲、亞洲、拉丁美洲部分國(guó)家，歐盟對(duì)嬰幼兒配方食品，包括嬰幼兒配方牛奶限量0.025μg/kg。另一個(gè)限量值為0.5μg/kg，有22個(gè)國(guó)家，包括美國(guó)、中國(guó)以及若干亞洲和歐洲國(guó)家。還有4個(gè)國(guó)家分別采用15、5、0.2μg/kg以及不得檢出

5、[6]。一些主要國(guó)家牛奶中AFM1的限量標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。3牛奶中AFM1的檢測(cè)方法3.1薄層層析法（TLC法）TLC法是測(cè)定牛奶中黃曲霉毒素的經(jīng)典方法，是通過(guò)肉眼比較定性或者半定量的檢測(cè)方法。其原理是將樣品經(jīng)提取、濃縮、薄層分離后，AFM1在紫外光（波長(zhǎng)365nm）下產(chǎn)生藍(lán)紫色熒光，根據(jù)其在薄層板上顯示熒光的最低檢出量與標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度相比較來(lái)測(cè)定含量。GB5009.24～2010食品中黃曲霉毒素M1和B1的測(cè)定、ISO14674：2005（IDF190：2005）牛奶和奶粉黃曲霉毒素M1的測(cè)定、AOAC974.17乳制品中黃曲霉毒素M1的測(cè)定和AOAC980.21牛奶和奶酪黃曲霉毒素M1

6、的測(cè)定就是采用的TLC法[7-10]。TLC法的優(yōu)點(diǎn)在于不依賴(lài)特殊儀器，成本低，易于普及，雙向展開(kāi)避免了雜質(zhì)干擾，被用于大規(guī)模的篩查研究中。雖然TLC法是牛奶中黃曲霉毒素M110測(cè)定的官方規(guī)定方法之一，但是隨著高效液相色譜和液相色譜-質(zhì)譜連用技術(shù)的發(fā)展，TLC的缺點(diǎn)也逐漸顯現(xiàn)：對(duì)樣品處理繁瑣，過(guò)程復(fù)雜，且提取和凈化效果不夠理想，雙向展開(kāi)增加了操作步驟和時(shí)間，對(duì)人和環(huán)境污染系數(shù)較大。3.2高效液相色譜法（HPLC法）HPLC法是利用免疫親和柱或C18柱將樣品中的AFM1萃取、凈化、濃縮、分離，再通過(guò)HPLC串聯(lián)不同檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。免疫親和柱是利用抗原抗體的特異性吸附特性，親和柱只能特異性、

7、選擇性地吸附AF，而其他雜質(zhì)則順利通過(guò)柱子，然后再利用洗脫液將AF洗脫下來(lái)。該方法大大簡(jiǎn)化了樣品的前處理過(guò)程，同時(shí)利用高效液相色譜進(jìn)行定量和定性，可以同時(shí)測(cè)出AF的總量和AFM1、AFB1、AFB2、AFG1、AFG2各自含量。我國(guó)GB/T23212～2008牛奶和奶粉中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1和M2的測(cè)定和GB5413.37～2010乳和乳制品中黃曲霉毒素M1的測(cè)定（第一法免疫親和層析凈化液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、第二法