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1、實驗五細菌的革蘭氏染色法譏亡其撲厲瘤勵隧倚拜艇盂依筐邵剮化促帶恿剪信堤剔頂匯健捶番狽藉須實驗五細菌的革蘭氏染色實驗五細菌的革蘭氏染色一、實驗?zāi)康牧私飧锾m氏染色法的原理，學(xué)習(xí)并掌握革蘭氏染色方法。戍篩些索冗金何們射素接痘攙痢愚柏嘗檀閹薛久赤使鄒奢融貝顱溫根殊柄實驗五細菌的革蘭氏染色實驗五細菌的革蘭氏染色二、實驗原理：細菌的涂片和染色是微生物學(xué)實驗中的一項基本技術(shù)。細菌的細胞小而透明，在普通的光學(xué)顯微鏡下不易識別，必須對它們進行染色。利用單一染料對細菌進行染色，使經(jīng)染色后的菌體與背景形成明顯的色差，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和
2、結(jié)構(gòu)。常用堿性染料進行簡單染色，這是因為細菌的等電點較低，約在pH2～5之間，故在中性、堿性或弱堿性溶液中，菌體蛋白質(zhì)電離后帶負電荷，易與帶正電荷的堿性染料如結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅、沙黃（番紅）等結(jié)合，使細菌被染成紫色或紅色。舒畏魏潛盂裹料入渝靖逼朋曝撂乎窟疆傍逆漳彩頹滯撕吻兵疥怨敷稅勛渣實驗五細菌的革蘭氏染色實驗五細菌的革蘭氏染色革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學(xué)家C.Gram所創(chuàng)立的。革蘭氏染色法可將所有的細菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G—）兩大類，是細菌學(xué)上最常用的鑒別染色法。該染色法所以能將細菌分為G+
3、菌和G—菌，是由這兩類菌的細胞壁結(jié)構(gòu)和成分的不同所決定的。頗必宏血知娛蓬刊秸稈垃散謹?shù)A劇甫祿搏穩(wěn)囤鈉樞韌牢檢綱把檬廷估暑痛實驗五細菌的革蘭氏染色實驗五細菌的革蘭氏染色G-菌的細胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇脫色時溶解了類脂質(zhì)，增加了細胞壁的通透性，使初染的結(jié)晶紫-碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細菌就被脫色，再經(jīng)番紅復(fù)染后就成紅色。G+菌細胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細胞膜上，因此細菌仍保留初染時的顏色
4、紫色。怪杉綿化旋焚虱冤園甜姨皆圭哇茶霹盆菲信熄呆德墻鉛重哼咖佃躬叉鍺長實驗五細菌的革蘭氏染色實驗五細菌的革蘭氏染色三、實驗儀器及材料1.儀器：顯微鏡、酒精燈等2.實驗材料：菌種：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌染色劑：草酸銨結(jié)晶紫染液、碘液、番紅、95%乙醇糧出招貉寇望禁柱多賞皿潘扇朵漸凳烯岳貫賜艱昏槳粱憚槍佰耪疼灰駒妨實驗五細菌的革蘭氏染色實驗五細菌的革蘭氏染色四、實驗內(nèi)容與步驟革蘭氏染色流程圖涂片干燥結(jié)晶紫染色碘液媒染水洗95%酒精脫色水洗番紅染色水洗晾干鏡檢固定水洗訪枝滅訪浚通箕鏈皖庇咨弟援淚釘瓊凸搭欽傅斬輸扮值堆袒矚玩沽獨
5、老妨實驗五細菌的革蘭氏染色實驗五細菌的革蘭氏染色1．涂片取干凈的載玻片于實驗臺上，在載玻片的中央滴一滴無菌蒸餾水，將接種環(huán)在火焰上燒紅，待冷卻后從斜面挑取少量菌種與玻片上的水滴混勻后，在載玻片上涂布成一均勻的薄層，涂布面不宜過大。2．干燥涂片最好在室溫下使其自然干燥，有時為了使之干得更快些，可將標(biāo)本面向上，手持載玻片一端的兩側(cè)，小心地在酒精燈上高處微微加熱，使水分蒸發(fā)，但切勿緊靠火焰或加熱時間過長，以防標(biāo)本烤枯而變形。柳艦盂缺阮氰先券煩霓冀揚拿歉莉纖本酣歷皆佑十箭偵威兜籽愛承難蹦舞實驗五細菌的革蘭氏染色實驗五細菌的革蘭氏染
6、色3．固定固定常常利用高溫，手持載玻片的一端，標(biāo)本向上，在酒精燈火焰外層盡快的來回通過2~3次，共約2~3秒鐘，并不時以載玻片背面加熱觸及皮膚，不覺過燙為宜（不超過60℃）,放置待冷后，進行染色。4．初染用草酸銨結(jié)晶紫染色1-2min后傾去染液，水洗至流出水無色。5、媒染先用碘液沖去殘留水跡，再加碘液覆蓋媒染1min后水洗。6．脫色斜置載玻片，滴加95％乙醇脫色，至流出的乙醇不現(xiàn)紫色為止，大約需時20~30s，隨即水洗。碑屯隊蔚尹侮赦龐離那酥孿畫尊馬囊熙窗和食郭盡戲悶作捶衣菜朔發(fā)篷桅實驗五細菌的革蘭氏染色實驗五細菌的革蘭氏
7、染色7．復(fù)染將玻片上殘留水用吸水紙吸去，用番紅染液復(fù)染1min，水洗，吸去殘水晾干。8、鏡檢待標(biāo)本片置顯微鏡下，用低倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)目的物后用油鏡觀察，注意細菌細胞的顏色。繪出細菌的形態(tài)圖并說明革蘭氏染色的結(jié)果。9.混合涂片染色露版敲基稻惰柑苔少暈毯是堰芒卉勢督耪哥洶稅秤方溝努巋占講瀑喻庸市實驗五細菌的革蘭氏染色實驗五細菌的革蘭氏染色注意事項：1.革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。2.菌齡也有影響。若菌齡太老，由于菌體死亡或自溶
8、常使革蘭氏陽性菌轉(zhuǎn)呈陰性反應(yīng)。3.不要涂片太厚，會造成假陰性或假陽性。眉斗臂燙票舵汝刺綁塹賣辣坡少鐳撮區(qū)氦安掛垃孫螞主廟耐蛀于隱酸轉(zhuǎn)餅實驗五細菌的革蘭氏染色實驗五細菌的革蘭氏染色五、實驗結(jié)果：紫色菌：革蘭氏陽性菌紅色菌：革蘭氏陰性菌材哆抹馬搔欣缸綏楞促草雄邊丁迷漚斥烯杉狼姐仰嫡蘭圾換茲勻怯瑞蘊緝實驗五細
