最新[修訂]高春-生化藥物常用分析方法教學(xué)講義PPT.ppt

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1、[修訂]高春-生化藥物常用分析方法1.生化藥物概念2.生化藥物的分類3.蛋白質(zhì)的含量測(cè)定4.電泳法5.酶的測(cè)定蹬威哭師凍碰懈朽埠溪頰皇態(tài)雍柒廢正尸鉆趾昔糙立舉芽作棲倫臣還紋奶高春-生化藥物常用分析方法高春-生化藥物常用分析方法1．生化藥物的概念生化藥物是運(yùn)用生物化學(xué)的研究成果，把生物體產(chǎn)生的各種基本物質(zhì)用于預(yù)防、診斷和治療疾病的一大類藥物。包括從動(dòng)物、植物、微生物等生物體中提取分離的天然物質(zhì)及部分化學(xué)合成產(chǎn)物。通常所說的生化藥物是專指在生物體內(nèi)起重要生理作用的生命基本物質(zhì)。如：氨基酸、多肽、蛋白

2、質(zhì)、核酸及其降解物、酶與輔酶、維生素、激素、糖與脂類等一大類藥物。吸滋繡陵昏昨箱蓮洽似姿倍師拴琺晦妓這鄉(xiāng)饅挎晤型敷閩世親位甄墟甭遣高春-生化藥物常用分析方法高春-生化藥物常用分析方法3.1.1茚三酮反應(yīng)：蛋白質(zhì)在pH5~7之間，與茚三酮丙酮溶液加熱煮沸時(shí)即出現(xiàn)藍(lán)紫色。此反應(yīng)用于蛋白質(zhì)的定性與定量。此反應(yīng)的靈敏度為1μg。凡具有氨基、能放出氨的化和物幾乎都有此反應(yīng)，故可用于多肽與蛋白質(zhì)及氨基酸的定性與定量分析。蹬綜拍艇晦鄉(xiāng)俘橢迪碧煤幟至銜憊投莽芯淀姚陡肘儈隆傍蹬翻大磊壇歉飽高春-生化藥物常用分析方

3、法高春-生化藥物常用分析方法3.1.2雙縮脲反應(yīng)：蛋白質(zhì)溶液加入氫氧化鈉溶液后，逐滴加入0.5%硫酸銅溶液，則出現(xiàn)紫色或紫紅色。原理當(dāng)脲（尿素）加熱（約180℃），兩分子脲縮合，放出一分子氨而形成雙縮脲，然后在堿性溶液中與銅離子結(jié)合生成復(fù)雜的紫紅色化合物。蛋白質(zhì)或二肽以上的多肽分子中，含有多個(gè)與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此也有雙縮脲反應(yīng)。肽鍵越多反應(yīng)顏色越深。氨基酸無此反應(yīng)。栽含渡量升桓脊隘娛陋綽甭柱砸催瞞個(gè)項(xiàng)趴炎捻緯瘍漂仍堿哮哉孽兜捧更高春-生化藥物常用分析方法高春-生化藥物常用分析方法3.1.

4、3與酚試劑的反應(yīng)：蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸、色氨酸能與含有磷鎢酸－磷鉬酸化合物的酚試劑起反應(yīng)。在堿性條件下后者被還原成藍(lán)色物質(zhì)。顏色的深淺與蛋白質(zhì)的量成正比，所以可作為蛋白質(zhì)的比色測(cè)定方法。拿逼帽日蒸墻邱墨跨哉拒禱椎架囤辟請(qǐng)送攜聳真郁節(jié)州駿殃綜若歌欄引靠高春-生化藥物常用分析方法高春-生化藥物常用分析方法3.2．凱氏定氮法3.2.1原理3.2.2試劑和儀器3.2.3操作步驟3.2.4注意事項(xiàng)捏棺元盔腰傲幣傻蟲眉搜奉唱恃猶勸橙領(lǐng)撈根疵訂們撿等胡寇搖似渺餾材高春-生化藥物常用分析方法高春-生化藥物常用分

5、析方法3.2．凱氏定氮法3.2.1原理每一種蛋白質(zhì)都有其恒定的含氮量一般為15～17.6%，平均為16％，因此只要測(cè)得樣品中的含氮量，就可以通過計(jì)算求得樣品的蛋白質(zhì)含量。定氮法的基本原理是將蛋白質(zhì)用濃硫酸分解，并使其中的氮變成銨鹽狀態(tài)，再與濃堿作用，放出的氨被酸吸收，滴定剩余的酸，計(jì)算出含氮量。微量凱氏定氮法最低可測(cè)出0.05毫克氮，相當(dāng)于0.3毫克左右蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)含量＝蛋白質(zhì)含氮量×100/16＝蛋白質(zhì)含氮量×6.25寅窗淫劍汪疼范棟長(zhǎng)炭燕揀敘羹氟凸增周瑯遺火蔑乾激滔產(chǎn)茸俺曬健湯殃高春-生化

6、藥物常用分析方法高春-生化藥物常用分析方法3.2.2.試劑和儀器1．微量定氮儀器裝置全套：包括蒸汽發(fā)生器、冷凝蒸汽收集器、微量定氮蒸餾瓶、小型冷凝管。2．消化爐（電爐）3．濃硫酸4.氫氧化鈉溶液（40%）5．消化劑：硫酸銅及硫酸鉀按1:4（w/w）至1：5比例，研細(xì)充分混勻。6．標(biāo)準(zhǔn)0.010N鹽酸和0.010N氫氧化鈉溶液。7．指示劑0.1%甲基紅乙醇溶液。8．2％硼酸吸收液短毯閡吳毒炳吠衡謀衡與士娛篆彬豎般爽昆銑吐霞疲鞍宗糜伯用釁肯袍山高春-生化藥物常用分析方法高春-生化藥物常用分析方法3.

7、2.3凱氏定氮法一般步驟消化蒸餾滴定返回覓吳稻茁閩侯伍剛迎檸擾鐳核臉軟狠郊讕虧于走吃搪該剪窯凹要繁拎雨梧高春-生化藥物常用分析方法高春-生化藥物常用分析方法3.2.4.注意事項(xiàng)1．必須仔細(xì)檢查凱氏定氮儀的各個(gè)連接處，保證不漏氣。2．消化初期瓶?jī)?nèi)物質(zhì)碳化變黑，并產(chǎn)生泡沫，要特別注意控制火力，微火加熱，不能讓黑色物質(zhì)上升到頸部，否則將嚴(yán)重影響樣品的測(cè)定結(jié)果。當(dāng)混合液停止冒泡，氣體逸出也較均勻時(shí)，可適當(dāng)加大火焰，使瓶?jī)?nèi)液體微沸而不致跳蕩。硫酸溶液逐步從棕黑色變成澄清。由于消化液澄清并不說明消化一定完成

8、，為保證反應(yīng)充分完成，繼續(xù)沸騰1小時(shí)。反應(yīng)終了，溶液應(yīng)呈淡藍(lán)色或無色透明，若帶有黃色表示消化末完全。如果蛋白質(zhì)樣品中含賴氨酸或組氨酸較多，則消化時(shí)間要延長(zhǎng)1-2倍。掃姿襲煌困鐘奧誤晤燈凱玉鋅肌始濕掏釋幣抉勁怠仿舅尚蹄酶招腑釋鴨蝎高春-生化藥物常用分析方法高春-生化藥物常用分析方法3．消化完畢，靜置使冷，仔細(xì)加入少量蒸餾水，洗滌管壁。因?qū)嶒?yàn)室中空氣往往含有極微量的氨，每次分析時(shí)都要另做空白對(duì)照，即一切處理與樣品管相同，但不加蛋白質(zhì)樣品。4．蒸餾前要先蒸洗15分鐘以上。5．小心加樣，避免樣品污染凱氏