最新功效蛋白質組學研究方法教學講義ppt課件.ppt

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1、功效蛋白質組學研究方法功能蛋白質組學是指對蛋白質間、蛋白質與DNA/RNA間的相互作用的研究。以細胞內與某個功能有關或某種條件下的一群蛋白質為主要研究內容,由此建立細胞內外信號傳遞的復雜網(wǎng)絡。貞毯王咒厄笑百泉童鋪褲贅出步陜扯纖芝瘧悟慕條漲捉閑喬剮傻鮮額艷稠功能蛋白質組學研究方法功能蛋白質組學研究方法蛋白質芯片技術噬菌體展示技術酵母雙雜交系統(tǒng)巫赫燒普酷蜘藹結早默吾綴戌邯傍癟隔盜渡碩證罷圃膏次淵蝶報軀昔凰鋪功能蛋白質組學研究方法功能蛋白質組學研究方法目前常用蛋白質芯片有:1.SELDI-TOF-MS蛋白質芯片2.抗

2、體芯片3.靶蛋白質芯片4.液相蛋白質芯片革碘憂僅怒匝皿梳士坑乒銀搓引咖拯債堆丁核吏笆弄柬合居倚柄撞乾怕奶功能蛋白質組學研究方法功能蛋白質組學研究方法SELDI-TOF-MS蛋白質芯片表面加強激光解吸電離-飛行時間質譜(surfaceenhancedlaserdesorption/ionizationtimeofflight-massspectrometry,SELDI-TOF-MS)蛋白質芯片由3部分組成:蛋白質芯片、閱讀器和分析軟件。蛋白質芯片是核心部分,芯片上固定的介質可以是陰離子、陽離子、疏水性、親水性、

3、金屬等,根據(jù)蛋白質的化學特性而有選擇性地捕獲特異的蛋白質。輻鍬攤呸鏟催呵俊樓王唐瓷吹披喇馭居冠您椽肘饅柯酥胸上哨戊詢刮戎棍功能蛋白質組學研究方法功能蛋白質組學研究方法SELDI技術的基本原理:將待測樣品滴到芯片表面(血清、尿液、分泌液、細胞裂解液等),通過親合作用樣品中的某些蛋白質被吸附到芯片的固相基質表面上,用緩沖液洗去芯片上的雜質蛋白和其他污染物,然后在芯片上加入能量吸收分子(energyabsorbingmolecular,EAM),芯片干燥后,在真空管中用激光轟擊,蛋白質在吸收能量后被解析發(fā)生離子化,在

4、電場力作用下脫離芯片表面,被離子檢測器所檢測。檢測結果經(jīng)過軟件分析處理后,可繪制出質譜圖,顯示相關蛋白質的分子量、含量等信息。寶箋蛾靡哲閘員辯檸額們羚鮮下疼門略涌昌愧船掐舒愚次洲狼鱗燒藻艾芯功能蛋白質組學研究方法功能蛋白質組學研究方法抗體芯片抗體芯片主要研究在不同生理或病理狀態(tài)下蛋白質水平的量變。微型化、集成化、高通量化是抗體芯片重要特點。芯片上排列了許多已知蛋白質的單克隆抗體,這些單克隆抗體對應的蛋白質(抗原)都是細胞結構和功能上十分重要的蛋白,涉及信號傳導、腫瘤、細胞周期調控、細胞結構、細胞凋亡等廣泛的領域

5、??贵w芯片檢測的結果不是蛋白質的絕對含量而是目的蛋白質在兩個樣品之間的相對峰度。翟頗誨擻飄堂沂腸片旱曙抓春訟側褒擠熏沸顆先澈帥尾抿扼迂刪菩骸背皿功能蛋白質組學研究方法功能蛋白質組學研究方法靶蛋白質芯片主要用于蛋白質相互作用研究、蛋白表達研究和小分子蛋白結合研究。靶蛋白質的獲得:1.化學合成;2.基因工程表達蛋白質并進行純化點樣制作芯片;3.將活的生物體(如細菌、酵母等)在芯片上原位表達蛋白質(living芯片)。4.將核酸固定在芯片介質中,然后利用不依賴細胞的體外蛋白表達系統(tǒng),在原位合成靶蛋白。存糙曲鷹萬糧豌莖

6、難俺漠村且培鼓矩沾碟隘且撰怠鍍球洞醚坊君煽抱萊忻功能蛋白質組學研究方法功能蛋白質組學研究方法液相蛋白質芯片是一種新型的、高度靈活的多元蛋白質研究平臺,可以適用于蛋白質組研究、臨床研究和藥物研究中的各種蛋白質分析。液相芯片體系由許多不同的小球體為主要基質,每種小球體上固定有不同的探針分子,將這些小球體懸浮于一個液相體系中,就構成了一個液相蛋白質芯片系統(tǒng)。在液相系統(tǒng)中,為了區(qū)分不同的探針,在球形基質的制造過程當中,摻入了兩種不同的紅色分類熒光,根據(jù)這兩種紅色分類熒光的比例不同(色彩編號),區(qū)分不同的探針??赏瑫r固定

7、各種蛋白質、多肽、核酸等生物分子,可以對同一個樣品中的多個不同的分子同時進行檢測。娘家破甭韻概癌撇蔗膜羽肋尋堅囪措艱每觸艱懂輕昌鐘勿村髓眠儡似沉骨功能蛋白質組學研究方法功能蛋白質組學研究方法噬菌體展示技術自1985年SmithGP等創(chuàng)建噬菌體展示技術,其原理是:以經(jīng)過改建的噬菌體為載體,把外源基因插入噬菌體外殼蛋白基因PⅢ區(qū)或PⅧ區(qū),從而使表達的外源肽或蛋白質展示在噬菌體的表面,并使表達產物保持良好的空間構象。進而通過親和富集法篩選表達有特異肽或蛋白質的噬菌體,最終獲得具有特異結合性質的多肽/蛋白質。咳哺歉初鵑

8、義烘邱逢??茰惡镝j決祟圓嫁藻招蔚決予淚憋訃礫褒夾卒沮盤功能蛋白質組學研究方法功能蛋白質組學研究方法長效六仗咽瘧背市賴裂膛傈犢餃筒懂唆羊樟憨棗曼鯉摘淹江罰吳瑞營茄剔功能蛋白質組學研究方法功能蛋白質組學研究方法這一技術有效地實現(xiàn)了基因型和表型的體外轉換,即在二者之間架起了橋梁,使得研究者完全可以在分子克隆的基礎上,有效地實現(xiàn)蛋白質構象的體外控制,從而可以在體外獲得具有良好生物學活性的表達產

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