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1、基因組改組技術簡介微生物育種方法比較誘變：工作量大，效率低，不能定向育種?；蚬こ逃N：能實現(xiàn)定向育種，能生產(chǎn)外源蛋白；但是由于次級代謝產(chǎn)物是由微生物細胞內(nèi)的多酶體系催化完成，多酶體系中的各個酶由分散或連鎖的結構基因編碼，至今人們?nèi)圆荒芮宄私獯蠖鄶?shù)次級代謝產(chǎn)物合成基因的性質。因此目前對抗生素產(chǎn)生菌的基因改造，絕大多數(shù)仍難以完成?；蚪M改組：融合了前2種方法的優(yōu)點。基因組改組發(fā)展簡史1994年,Stemmer首先提出了在體外定向進化分子的方法--DNAshuffling技術。其方法是將同源的DNA用DNAaseI進行消化成片段,然后將得到的隨機片段無引
2、物PCR,使之重新隨機裝配,從而獲得了多種排列組合的突變基因庫,最后利用設計好的引物PCR,得到預期的重組體。A-B-C-D-E-F-GA-D-B-G-C-F-E1998年，Stemmer等又提出了genomeshuffling(全基因組改組),該種方法首先選擇一個原始親株,通過經(jīng)典的誘變育種方法獲得多個表型得到提高的菌株,構建突變候選株文庫,以這些表型提高的菌株作為首輪多親本融合的直接親株,然后進行多親株融合,使其全基因組進行隨機重組,獲得第一代融合株;再從中選擇表型獲得進一步提高的菌株作為下一輪融合的直接親本,依此類推進行多輪的多親株融合,最終從獲
3、得的突變體庫中篩選出性狀被提升的目的菌株。原生質體制備主要是在高滲溶液中加入細胞壁分解酶，將細胞壁分離剝離，結果剩下由原生質膜包住的類似球狀的細胞，它保持原細胞的一切活性影響原生質體制備的因素（1）菌體的前處理（2）菌體的培養(yǎng)時間（3）酶濃度（4）酶處理溫度（5）破壁時的ph值（6）滲透壓穩(wěn)定劑原生質體滅活為了防止未融合的原生質體再生，采用熱滅活或者紫外滅活的方法將原生質體殺死，保證只有融合后的融合子能夠再生。影響原生質體滅活的因素（1）原生質體的濃度（2）滅活的溫度（3）紫外線的強度（4）紫外照射的距離（5）滅活時間原生質體融合制備好的二親本原生質體
4、可通過融合劑的作用進行融合，融合劑有化學融合劑和物理融合劑?，F(xiàn)在普遍采用的是PEG（聚乙二醇）介導的化學融合法。影響原生質體融合的因素（1）PEG（2）無機離子（3）溫度（4）親株的親緣關系（5）原生質體的活性（6）細胞濃度原生質體再生融合后的原生質體在加穩(wěn)定劑的再生培養(yǎng)基上能重新形成細胞壁，恢復正常的細胞形態(tài)，并能生長繁殖，形成菌落。影響原生質體再生的因素（1）菌種本身特性（2）原生質體制備條件（3）再生培養(yǎng)基成分（4）再生培養(yǎng)條件基因組改組技術基因組改組技術是建立在原生質體融合技術基礎之上的一種菌種選育新技術，首先選擇一個原始親株，通過經(jīng)典的誘變育
5、種方法獲得多個表型得到提高的菌株，構建突變候選株文庫，以這些表型提高的菌株作為首輪多親本融合的直接親株，然后進行多親株融合，使其全基因組進行隨機重組，獲得第一代融合株；再從中選擇表型獲得進一步提高的菌株作為下一輪融合的直接親本，依此類推進行多輪的多親株融合，最終從獲得的突變體庫中篩選出性狀被提升的目的菌株Genomeshuffling技術的方法概括從基因組改組技術的原理來看，進行基因組改組，首先要運用誘變育種的方法，以獲得目的性狀得到改進的正向突變菌株的基因組庫，并作為首輪多親株融合的直接親株。誘變育種的具體操作要根據(jù)不同菌種的特性而異。然后進行多親株
6、的遞推式融合（recursivefusion）。遞推式融合的操作方法與原生質體融合技術基本相同，首先要進行原生質體制備和滅活，隨后是原生質體融合、再生、鑒定和挑選等。謝謝！EMILLWWWDBDNS網(wǎng)管工科教學樓文科樓實驗樓教學樓體育館３＃家屬樓１＃家屬樓４＃家屬樓６＃家屬樓７＃家屬樓９＃家屬樓５＃家屬樓８＃家屬樓12#家屬樓２＃家屬樓科技館音樂樓１０＃家屬樓11#家屬樓8#學生公寓7#匯聚中心9#學生公寓10#學生公寓網(wǎng)絡中心圖書館綜合實驗樓農(nóng)學區(qū)圖書館農(nóng)學教學樓農(nóng)學實驗樓１＃家屬樓２＃家屬樓CERNET防火墻食堂校醫(yī)院1000M光纖校園計算機網(wǎng)絡拓
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