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1、江南大學(xué)2010年考研試題江南大學(xué)微生物(食品)(回憶版)2010江南大學(xué)微生物（食品）（回憶版）一、名詞解釋：（共10個）菌落、溫和性噬菌體、益生菌、生長因子、二、圖解釀酒酵母的生活史、Amestest、D值和Z值三、填空1、一般消毒的條件（）攝氏度（）分鐘；干熱滅菌的條件（）攝氏度，（）分鐘2、米粉變質(zhì)的主要微生物及原因3、新鮮蔬菜變質(zhì)的主要微生物及原因四、簡答題1、比較枯草芽孢桿菌與大腸桿菌的異同2、PCR技術(shù)3、單克隆抗體的制備五、論述題1、影響延滯期的因素，并利用此原理說明制備酸奶是應(yīng)注意什么2、如何制備甲型H1N1疫苗3、
2、如何鑒定大腸菌群，所用培養(yǎng)基屬于什么類型三、簡答：4、影響微生物耐熱性的因素并論證D、Z值的關(guān)系B淋巴細(xì)胞在抗原的刺激下，能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細(xì)胞的這種能力和量是有限的，不可能持續(xù)分化增殖下去，因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其微小的。將這種B細(xì)胞與非分泌型的骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，再進(jìn)一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞是既具有瘤的無限生長的能力，又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)或注入小鼠體內(nèi)即可獲得大量的高效價、單一的特異性抗體。這種技術(shù)即稱為單克隆抗
3、體技術(shù)。過程1）免疫脾細(xì)胞的制備制備單克隆抗體的動物多采用純系Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質(zhì)。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內(nèi)直接免疫法。2）骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)與篩選在融合前，骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)經(jīng)過含8-AG的培養(yǎng)基篩選，防止細(xì)胞發(fā)生突變恢復(fù)HGPRT的活性（恢復(fù)HGPRT的活性的細(xì)胞不能在含8-AG的培養(yǎng)基中存活）。骨髓瘤細(xì)胞用10%小牛血清的培養(yǎng)液在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，融合前24h換液一次，使骨髓瘤細(xì)胞處于對數(shù)生長期。3）細(xì)胞融合的關(guān)鍵:1技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗。例如，供者淋巴細(xì)胞沒有查到免疫應(yīng)答。這必然要失
4、敗的。2融合試驗最大的失敗原因是污染，融合成功的關(guān)鍵是提供一個干凈的環(huán)境，以及適宜的無菌操作技術(shù)。4）陽性克隆的篩選應(yīng)盡早進(jìn)行。通常在融合后10天作第一次檢測，過早容易出現(xiàn)假陽性。檢測方法應(yīng)靈敏、準(zhǔn)確、而且簡便快速。具體應(yīng)用的方法應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì)，以及所需單克隆抗體的功能進(jìn)行選擇。常用的方法有RIA法、ELISA法和免疫熒光法等。其中ELISA法最簡便，RIA法最準(zhǔn)確。陽性克隆的篩選應(yīng)進(jìn)行多次，均陽性時才確定為陽性克隆進(jìn)行擴(kuò)增。5）克隆化克隆化的目的是為了獲得單一細(xì)胞系的群體?？寺』瘧?yīng)盡早進(jìn)行并反復(fù)篩選。這是因為初期的雜交瘤細(xì)胞是不穩(wěn)
5、定的，有丟失染色體的傾向。反復(fù)克隆化后可獲得穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)胞株?？寺』姆椒ê芏?，而最常用的是有限稀釋法。（1）顯微操作法：在顯微鏡下取單細(xì)胞，然后進(jìn)行單細(xì)胞培養(yǎng)。這種方法操作復(fù)雜，效率低，故不常用。（2）有限稀釋法：將對數(shù)生長期的雜交瘤細(xì)胞用培養(yǎng)液作一定的稀釋后，按每孔1個細(xì)胞接種在培養(yǎng)皿中，細(xì)胞增值后成為單克隆細(xì)胞系。第一次克隆化時加一定量的飼養(yǎng)細(xì)胞。由于第一次克隆化生長的細(xì)胞不能保證單克隆化，所以為獲得穩(wěn)定的單克隆細(xì)胞株需經(jīng)2～3次的再克隆才成。應(yīng)該注意的是，每次克隆化過程中所有有意義的細(xì)胞都應(yīng)冷凍保存，以便重復(fù)檢查，避免丟失有
6、意義的細(xì)胞。（3）軟瓊脂法：將雜交瘤細(xì)胞稀釋到一定密度，然后與瓊脂混懸。在瓊脂中的細(xì)胞不能自由移動，彼此互不相混，從而達(dá)到單細(xì)胞培養(yǎng)的目的。但此法不如有限稀釋法好。（4）熒光激光細(xì)胞分類法：用抗原包被的熒光乳膠微球標(biāo)記雜交瘤細(xì)胞，然后根據(jù)抗原與雜交瘤細(xì)胞結(jié)合的特異性選出細(xì)胞，并進(jìn)行單細(xì)胞培養(yǎng)。6）細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇7）大規(guī)模單克隆抗體的制備選出的陽性細(xì)胞株應(yīng)及早進(jìn)行抗體制備，因為融合細(xì)胞隨培養(yǎng)時間延長，發(fā)生污染、染包體丟失和細(xì)胞死亡的機(jī)率增加。抗體制備有兩種方法。一是增量培養(yǎng)法，即將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)，在培養(yǎng)液中分離單克隆抗體。該法需
7、用特殊的儀器設(shè)備，一般應(yīng)用無血清培養(yǎng)基，以利于單克隆抗體的濃縮和純化。最普遍采用的是小鼠腹腔接種法。選用BALB/c小鼠或其親代小鼠，先用降植烷或液體石蠟行小鼠腹腔注射，一周后將雜交瘤細(xì)胞接種到小鼠腹腔中去。通常在接種一周后即有明顯的腹水產(chǎn)生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，有時甚至超過40ml。該法制備的腹水抗體含量高，每毫升可達(dá)數(shù)毫克甚至數(shù)十毫克水平。此外，腹水中的雜蛋白也較少，便于抗體的純化。意義：用于以下各種生命科學(xué)實驗并具有醫(yī)用價值（1）沉淀反應(yīng)：Precipitationreaction（2）凝集實驗：haemaglut
8、ination（3）放射免疫學(xué)方法檢測免疫復(fù)合物（4）流式細(xì)胞儀：用于細(xì)胞的分型和細(xì)胞分離。（5）ELISA等免疫學(xué)檢測（6）BIAcorebiosensor:檢測Ab-Ag或與蛋白的親和力。(7)免疫印記（wester
