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1、普飛生物商城www.pufei.com試劑耗材一體化采購平臺簡便、快捷、準確－臨床診斷中的FISH檢測??FISH（即熒光原位雜交）技術作為分子診斷的重要工具，在科研和臨床診斷領域都有著廣泛的應用。FISH檢測是利用熒光基團標記DNA探針，再將標記的DNA探針與樣本DNA進行原位雜交，最后在熒光顯微鏡下對熒光信號進行計數，以此作為診斷的依據。FISH的操作簡便快捷，結果直觀準確，因此FISH成了許多疾病診斷的首選工具。下面我們將從探針的設計，樣本的制備，原位雜交和檢測結果的觀察等幾個方面簡單介紹FIS
2、H的操作。???探針的預備1.讓探針加熱至室溫，降低探針的粘度，使用合適的移液管2.振蕩混合。用微型離心機將內容物離心（1-3秒）至底部。輕輕振蕩再次混勻3.注意：該探針已經經過變性可直接與樣本片子反應。若探針是非降解型，需進行73℃5分鐘的變性雜交1.在片子上，將10μL的CEP18/X/Y混合探針加到一個反應區(qū)，將10μ的LLSI13/21混合探針加至另一個反應區(qū)。將22mm×22mm的蓋玻片立刻覆蓋反應區(qū)，使探針溶液彌漫整個覆蓋區(qū)。氣泡會干擾雜交，因此必須排除氣泡注意普飛生物商城www.pufe
3、i.com試劑耗材一體化采購平臺探針是FISH檢測靈敏度和準確性的關鍵。FISH檢測的準確性來源于探針的設計。FISH能否應用于某一領域也取決于是否具有相應的探針。用于FISH檢測的探針必須具備很高的特異性，能特異性地識別特定的基因或染色體上特定的片斷。而且FISH的探針必須能經受原位雜交的處理而不變性。熒光基團的標記也直接影響了檢測的靈敏度和原位雜交結果的檢測方式。以著名的探針生產商Vysis公司的LSI系列探針為例：LSI系列探針來源于BAC大片斷基因組文庫，探針所覆蓋的染色體片斷總長可達100K
4、b－400Kb，保證了探針的高特異性和極強的熒光信號；熒光基團采用直接標記法標記，不同波長的熒光基團使探針在熒光顯微鏡下呈現多種熒光信號，借此我們可以一次檢測多個染色體或基因的異常；由于探針具有極強的熒光信號因而對FISH結果的檢測也采用直接檢測法，即在熒光顯微鏡下直接觀察FISH的信號，而無需抗原－抗體反應對熒光信號進行放大。Vysis探針的設計既確保了探針的特異性和靈敏度，同時直接的鏡檢也使FISH檢測更簡便。???FISH檢測對被測樣本沒有特殊的要求?？梢允莵碜怨撬璧募毎部梢允莵碜匝蛩募毎?/p>
5、；可以是冰凍切片的樣本，也可以是經過石蠟包埋的樣本。甚至可以利用尿液樣本進行膀胱癌復發(fā)的預后。獲取的樣本細胞也無需經過培養(yǎng)擴增，FISH檢測可以顯示單個細胞核內染色體的異常情況。???：在蓋玻片覆蓋前，不能在多目標區(qū)加探針溶液；蓋玻片應37℃預熱1.用樹膠封片：用5ml的注射器吸去樹膠，在蓋玻片的四周加上樹膠2.將封好的片子放入37℃預熱的雜交盒中，蓋緊蓋子，37℃孵育6-24小時雜交后的沖洗1.在科普林染色缸中加入0.4×SSC/0.3%NP-40。將染色缸放入73±1℃的水浴中半小時以上，使0.4
6、×SSC/0.3%NP-40溶液的溫度達到73±1℃。每批使用前都必須確保0.4×SSC/0.3%NP-40溶液的溫度達到73±1℃2.在科普林染色缸中加入2×SSC/0.1%NP-40，放置至室溫。兩種洗液使用過一天后就應丟棄3.普飛生物商城www.pufei.com試劑耗材一體化采購平臺我們以Vysis公司的AneuVysion多色DNA探針試劑盒為例，簡要介紹FISH的原位雜交過程。AneuVysion多色DNA探針試劑盒用于羊水細胞的產前診斷，樣本是來源于羊水的細胞。試劑盒通過兩組5種探針（L
7、SI13/21和CEP18/X/Y）同時檢測5個染色體的數目異常，以此為依據進行產前診斷。樣本的制備1.1000轉/分離心羊水（AF）5分鐘。羊水應沒有血色或褐色。2.用2-5ml的1×胰酶/EDTA溶液（0.05%胰酶，0.53MEDTA4Na的Hank氏平衡鹽溶液，不含CaCl2、MgCl2.6H2O、MgSO4.7H2O）懸浮沉淀，37℃水浴15分鐘以上3.1000轉/分離心5分鐘4.用2-5ml的0.56%KCl溶液懸浮細胞，37℃水浴20分鐘。這些處理步驟的目的是使羊水細胞成為懸浮的單細胞。
8、5.加0.8-2ml的固定液（3∶1甲醇∶冰醋酸）至細胞低滲液中，輕輕混勻6.挪去樹膠和蓋玻片，將片子立即放入73±1℃裝有0.4×SSC/0.3%NP-40的科普林染色缸中，漂洗3秒左右。其他片子同樣操作，然后孵育2分鐘。不要同時操作4片以上。假如操作4片以上，取保0.4×SSC/0.3%NP-40的溫度在73±1℃注意：在洗浴前不能揭去蓋玻片。當最后一片進入洗液后，開始計時2分鐘1.將片子放入裝有2×SSC/0.1%NP-40的科普林染色缸中室溫放置
