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《實(shí)驗(yàn)4-殺蟲劑毒力測(cè)定ppt課件》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
殺蟲劑毒力測(cè)定吳順凡農(nóng)藥科學(xué)系殺蟲劑毒理與害蟲抗藥性監(jiān)測(cè)課題組郵箱：wusf@njau.edu.cn；辦公室：理科樓B8282014-4-18實(shí)驗(yàn)四
1基本概念殺蟲劑的生物測(cè)定：是度量殺蟲劑對(duì)昆蟲及螨類產(chǎn)生效應(yīng)大小的農(nóng)藥生物測(cè)定方法。廣義的說，就是利用生物（昆蟲、螨）對(duì)殺蟲劑的反應(yīng)來鑒別某一種農(nóng)藥或化合物的生物活性的一種基本方法;殺蟲劑毒力測(cè)定主要內(nèi)容：一是初步毒力測(cè)定，二是精密毒力測(cè)定;初步毒力測(cè)定一般只判斷藥劑是否具有殺蟲活性，不能確定化合物的毒力大小，也不能區(qū)分毒殺作用方式。精密毒力測(cè)定是指在特定條件下衡量某種殺蟲劑對(duì)某種昆蟲毒力程度的一種作用方式。
2測(cè)定方法的選擇不同的殺蟲劑對(duì)不同種類的害蟲毒力程度各異，致毒作用方式也不相同，所以測(cè)定方法也各不相同；殺蟲劑的作用方式主要有：觸殺、胃毒、內(nèi)吸、熏蒸、驅(qū)避、引誘、拒食生長發(fā)育調(diào)節(jié)等；一般說來，一種試驗(yàn)方法往往只局限殺蟲作用方式的一個(gè)方面，因此在測(cè)定的方法的選擇上也應(yīng)根據(jù)殺蟲劑的作用方式進(jìn)行設(shè)計(jì)。
3主要內(nèi)容觸殺毒力測(cè)定；胃毒毒力測(cè)定；熏蒸毒力測(cè)定；內(nèi)吸毒力測(cè)定。
4觸殺毒力測(cè)定殺蟲劑的觸殺作用是使藥劑經(jīng)昆蟲表皮、感覺器及爪墊進(jìn)入體內(nèi)而產(chǎn)生的毒殺作用。殺蟲劑觸殺作用測(cè)定時(shí)應(yīng)盡量避免藥劑經(jīng)口、氣門等途徑進(jìn)入體內(nèi)。由于目前使用的殺蟲劑大多數(shù)具有較強(qiáng)的觸殺作用，因此殺蟲劑的觸殺毒力測(cè)定應(yīng)用非常普遍。觸殺毒力的大小通常以LD50、LC50或KT50表示。測(cè)定方法可分為整體處理法和局部處理法，常用的有點(diǎn)滴法，浸液法、藥膜法、噴霧法、噴粉法及銅絲圈法等。
5點(diǎn)滴法：因其施藥量比較準(zhǔn)確，易于操作而運(yùn)用最為普遍。但點(diǎn)滴法一般要求供試?yán)ハx數(shù)量較多，另外點(diǎn)滴部位及每頭蟲體點(diǎn)滴藥液的體積和點(diǎn)滴散布面積要求相同，否則有明顯影響；噴霧法與噴粉法最接近田間情況，但噴霧（粉）時(shí)的壓力是影響藥劑噴灑是否均勻的重要原因，此外有時(shí)還不能完全消除胃毒毒力的可能；藥膜法比較接近實(shí)際防治情況，操作方便。多用來比較觸殺速率，常用來測(cè)定藥劑的擊倒作用。以擊倒中時(shí)（KT50）即擊倒50%供試?yán)ハx所需時(shí)間（分鐘）來表示或測(cè)定殺蟲劑對(duì)蟲體很?。ㄈ缢E馬、赤眼蜂等）的昆蟲的毒力；浸液法最為簡(jiǎn)單，但易產(chǎn)生胃毒毒力，對(duì)水生昆蟲如孑孓以及水蚤等較為適宜。
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8點(diǎn)滴法實(shí)驗(yàn)步驟預(yù)備試驗(yàn)：將配好的原藥丙酮液，用毛細(xì)管微量點(diǎn)滴器點(diǎn)滴0.04微升藥液于3齡棉鈴蟲幼蟲胸部背面，每組處理2-3個(gè)濃度（參照已知同類殺蟲劑，用丙酮配制低濃度和高濃度的藥液，找出活蟲組劑量和死蟲組劑量）。每濃度處理10頭幼蟲，經(jīng)24～28小時(shí)（昆蟲生長調(diào)節(jié)劑類藥劑如蟲酰肼所需時(shí)間還應(yīng)長些）觀察記載幼蟲死、活情況。同時(shí)取50頭昆蟲點(diǎn)滴丙酮液作空白對(duì)照試驗(yàn)。根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)的結(jié)果，配制系列梯度濃度（等比系列）的藥液，包括從最低濃度（活蟲組的劑量）開始，到最高濃度（死亡組的劑量）止。
9將標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試幼蟲挑入具半人工飼料的培養(yǎng)皿（直徑為5cm）中，每皿5或6頭藥劑用丙酮配制成等比系列濃度用0.04μl毛細(xì)管點(diǎn)滴器將藥液滴于幼蟲胸部背面點(diǎn)滴法操作
10每濃度點(diǎn)10頭，重復(fù)3次，共30頭，以丙酮為對(duì)照，處理幼蟲飼養(yǎng)條件：溫度27±1℃，光照周期16∶8(L∶D)h。點(diǎn)滴法操作
11處理后幼蟲單獨(dú)飼養(yǎng)，分別記錄處理劑量，根據(jù)處理劑量和毛細(xì)管點(diǎn)滴器的體積計(jì)算出每頭幼蟲的受藥量(微克/頭)。（字幕配音、放置培養(yǎng)箱視頻）整理試驗(yàn)結(jié)果，算出該藥劑對(duì)供試?yán)ハx的致死中量（LD50）。數(shù)據(jù)計(jì)量與分析
12（二）噴霧法和噴粉法用Potter噴霧塔直接對(duì)昆蟲噴灑也是常用的觸殺毒力測(cè)定方法。藥液管1通氣管2藥液管載物臺(tái)
13Potter噴霧塔構(gòu)造Potter噴霧塔是一個(gè)文氏管（Venturitube）形的筒，即兩端大中間細(xì)，霧點(diǎn)是直接往下噴的。噴筒采用文氏管形是為了沉降霧點(diǎn)的壓力一致，使噴灑物表面沉積的藥液量更為均勻，噴筒下面有一個(gè)平臺(tái)，可放被噴灑物，此平臺(tái)可上下調(diào)節(jié)，使噴筒下沿與平臺(tái)間保持適當(dāng)?shù)木嚯x（距離過大，液滴大部分四散；距離過小，造成返回氣流）。整個(gè)裝置放在一個(gè)大玻璃櫥內(nèi)，以保持溫度和噴霧出口處的霧點(diǎn)不受外部氣流的影響。噴霧采用有霧化器的噴頭（靠氣流霧化），在一定壓力下，噴出的霧點(diǎn)可相當(dāng)均勻穩(wěn)定。
14Potter噴霧塔噴霧步驟取培養(yǎng)皿18套，每套放3齡期大小相同的棉鈴蟲幼蟲10頭。將配制好一定濃度的藥液用吸管準(zhǔn)確吸取2mL放入小瓶?jī)?nèi)。將盛棉鈴蟲的培養(yǎng)皿放在噴霧臺(tái)玻璃罩中心。開動(dòng)馬達(dá)讓藥液在規(guī)定時(shí)間內(nèi)（約30秒鐘）將小瓶?jī)?nèi)藥液全部噴出（試驗(yàn)前予先調(diào)節(jié)好壓縮泵之壓力達(dá)到1kg/cm2，并使每次噴藥時(shí)壓力保持一致）。立即將噴過藥的棉鈴蟲放在干凈培養(yǎng)皿中，喂以人工飼料飼養(yǎng)，于2、24、48小時(shí)后記錄棉鈴蟲死亡情況。
15胃毒毒力測(cè)定胃毒毒力測(cè)定指通過試蟲吞食帶藥食料，引起消化道中毒致死的反應(yīng)，以測(cè)定胃毒毒力殺蟲劑生物測(cè)定方法。殺蟲劑對(duì)昆蟲的胃毒毒力測(cè)定方法因靶標(biāo)昆蟲的種類和殺蟲劑的劑型不同而有所不同。根據(jù)目標(biāo)昆蟲取食量及習(xí)性的差異可分為：無限取食法和定量取食法。無限取食法：飼料混藥喂蟲法、培養(yǎng)基混藥法、土壤混藥法定量取食法：葉片夾毒法、液點(diǎn)食喂法、口腔注射法
16毒飼料喂蟲法將稱好的藥粉同谷物等飼料混合均勻，或?qū)⑺巹┤苡谟袡C(jī)溶劑中（如丙酮），再將一定量的藥液同食物混勻，待溶劑揮發(fā)后供試。接入標(biāo)準(zhǔn)一致試蟲，每處理20～50頭。然后置于適合該試蟲生長的條件下（26℃～30℃）培養(yǎng)5d或7d后，檢查死蟲數(shù)。采用采用POLO-Plus軟件計(jì)算毒力回歸曲線b值及其標(biāo)準(zhǔn)誤、LC50值及95%置信限。
17數(shù)據(jù)處理—機(jī)率值分析法機(jī)率值分析法是傳統(tǒng)的農(nóng)藥生物測(cè)定統(tǒng)計(jì)的最重要的基礎(chǔ)方法；在一個(gè)群體中，死亡率與劑量或濃度呈近乎正態(tài)分布，即稍偏離正態(tài)分布的曲線。把劑量轉(zhuǎn)換成對(duì)數(shù)時(shí)，略有偏正的正態(tài)分布就變成了正態(tài)分布，并計(jì)算得到對(duì)數(shù)-死亡機(jī)率值線（也稱毒力回歸線）；至今為止已開發(fā)了許多計(jì)算機(jī)程序軟件，如SAS、POLO、DPS、SPSS、EPA、BA等。
18死亡率-幾率值表
191、劑量濃度轉(zhuǎn)換成為對(duì)數(shù)使偏常態(tài)分布變成正態(tài)分布變成對(duì)稱的“S”曲線。2、?死亡率轉(zhuǎn)換成機(jī)率值?：（1）?首先：5-7個(gè)劑量——死亡率的點(diǎn)來確定“S”型曲線，可以畫出很多條適應(yīng)這5~7點(diǎn)的曲線；（2）S曲線的特點(diǎn)是兩端平緩，中間一段陡峭，因此在死亡率靠近50%時(shí)，劑量對(duì)數(shù)變化不大，圖為劑量對(duì)數(shù)—死亡率機(jī)率指表。寫成Y=bx+a的直線，從機(jī)率值為5處做一條與橫坐標(biāo)平行的直線與回歸線相交的對(duì)數(shù)值，查反對(duì)數(shù)，即為致死中量。農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定統(tǒng)計(jì)分析的步驟：
20POLO的使用第一步在文本文檔中輸入數(shù)據(jù)（如圖）第二步打開POLO軟件，并在軟件中打開數(shù)據(jù)，如圖，檢查數(shù)據(jù)，確定退出后計(jì)算即可得到需要的毒力回歸線。
21毒力曲線為Y=2.152x+4.152，致死中濃度(95%置信限)為2.479mg/L（1.523-4.156mg/L），卡方值為χ2=4.44，自由度為3。
