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《運用基因槍法進行蛹蟲草遺傳轉(zhuǎn)化的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、園藝學報，2015，42(9)：1837–1842.ActaHorticulturaeSinicadoi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0145；http：//www.ahs.ac.cn1837運用基因槍法進行蛹蟲草遺傳轉(zhuǎn)化的研究****茅文俊，鮑大鵬，周陳力，李燕，譚琦，汪瀅（國家食用菌工程技術研究中心，農(nóng)業(yè)部南方食用菌資源利用重點實驗室，上海市農(nóng)業(yè)遺傳育種重點實驗室，上海市農(nóng)業(yè)科學院食用菌研究所，上海201403）摘要：采用蛹蟲草[Cordycepsmilitaris（L.）Link]野生型菌株CM01為供試材料，以金粉
2、包裹質(zhì)粒pDHt-gpdA-GFP-bar，運用基因槍法轉(zhuǎn)化，經(jīng)草銨膦抗性篩選，最終在靶距離6cm或9cm，氦氣壓力66-17.58×10Pa或8.96×10Pa條件下，獲得2個遺傳穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化子Gfp2與Gfp3，轉(zhuǎn)化效率為0.4cfu·μg。PCR鑒定與Southern雜交分析顯示，草銨膦抗性基因Bar已經(jīng)以單拷貝或者多拷貝方式整合到蛹蟲草轉(zhuǎn)化子的基因組中。蛹蟲草轉(zhuǎn)化子的菌絲在熒光顯微鏡下可以觀測到綠色熒光，表明載體攜帶的綠色熒光蛋白基因在蛹蟲草轉(zhuǎn)化子中得到表達。研究結果表明可以把基因槍法應用于真菌蛹蟲草，建立了一種簡便有效的遺傳轉(zhuǎn)化方法，而轉(zhuǎn)化效率需要
3、通過優(yōu)化基因槍參數(shù)設置、受體材料制備等途徑進一步提高。關鍵詞：蛹蟲草；基因槍；遺傳轉(zhuǎn)化；綠色熒光蛋白中圖分類號：S567；S646文獻標志碼：A文章編號：0513-353X（2015）09-1837-06EffectiveTransformationofCordycepsmilitarisbyParticleBombardment****MAOWen-jun，BAODa-peng，ZHOUChen-li，LIYan，TANQi，andWANGYing（InstituteofEdibleFungi，ShanghaiAcademyofAgriculturalS
4、ciences，KeyLaboratoryofEdibleFungiResourcesandUtilization（South），MinistryofAgriculture，P.R.，China，NationalEngineeringResearchCenterofEdibleFungi，KeyLaboratoryofAgriculturalGeneticsandBreedingofShanghai，Shanghai201403，China）Abstract：AneffectiveandconvenienttransformationmethodofCor
5、dycepsmilitariswereestablishedbymeansofparticlebombardment.CoatingmicrocarrierswithplasmidpDHt-gpdA-GFP-bar，wetransferredC.militarisCM01byparticlebombardment.Afterbeingselectedbyglufosinate-ammonium，twotransformantswereobtainedunderthreeconditionsdifferinginthetwoparametersoftarge
6、tdistance66（6cmor9cm）andheliumpressure（7.58×10Paor8.96×10Pa）.Thetransformationfrequencywas-10.4cfu·μg.PCRandsouthernblotresultsindicatedthattheselectivemarkergeneBarwasintegratedintothegenomicDNA，asinglecopyormultiplecopiesintegration，andgeneticallystable.GreenfluorescenceoftheC.m
7、ilitaristransformantmyceliacouldbeobservedunderfluorescentmicroscope，whichindicatedthattheexpressionofgreenfluorescentproteinwassuccessfulintheC.militaristransformants.TransformationbyparticlebombardmentenrichedthetransformationmethodsofC.militaris.However，samplepreparationandpara
8、metersettingneedtobeoptimized，ino
