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《共振光散射測(cè)定辣根過(guò)氧化物酶》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第29卷第2期河北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)Vol.29No.22009年3月JournalofHebeiUniversity(NaturalScienceEdition)Mar.2009共振光散射測(cè)定辣根過(guò)氧化物酶李正平,王磊,高瑞廣,劉秀賢(河北大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,河北保定071002)摘要:辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化H2O2氧化四甲基聯(lián)苯胺(TMB)生成大分子聚合物并產(chǎn)生強(qiáng)烈的共振光散射,由此建立了操作簡(jiǎn)單快速、高靈敏度測(cè)定HRP的新方法.探討了酸度、TMB濃度、H2O2濃-7-6度、溫度等對(duì)散射信號(hào)的影響.在
2、最佳實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)定HRP的線性范圍為1×10～1×10g/L,最低檢-8出限1.8×10g/L.關(guān)鍵詞:辣根過(guò)氧化物酶;四甲基聯(lián)苯胺;共振光散射中圖分類號(hào):O657.39文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1000-1565(2009)02-0173-04DeterminationofHRPUsingaRLSTechniqueLIZheng2ping,WANGLei,GAORui2guang,LIUXiu2xian(CollegeofChemistryandEnvironmentalScience,HebeiUniversity,
3、Baoding071002,China)Abstract:AnovelassayfordetectionofHRPusingresonancelightscattering(RLS)hasbeenestab2lished.Themethodisbasedonthat3,3′,5,5′2tetramethylbenzidine(TMB)isoxidizedtoformmacro2moleculepolymerbyH2O2withHRPcatalysis,whichresultsintheintenseRLSsignal.
4、Thisassayissim2ple,rapidandsensitive.Theoptimumanalysisconditionshavebeeninvestigated,includingacidity,thecon2centrationofTMBandH2O2,andreactiontemperature.Thereisagoodlinearrelationshipbetweenthein2-7-6tensityofRLSandtheconcentrationoftheHRPintherangeof1×10～1×1
5、0g/Landthedetection-8limitwas1.8×10g/L.Keywords:horseradishperoxidase(HRP);tetramethylbenzidine(TMB);resonancelightscattering(RLS)近年來(lái),以酶為標(biāo)記物的酶聯(lián)免疫分析方法的研究發(fā)展迅速,已廣泛應(yīng)用于疾病診斷、病毒鑒定等很多領(lǐng)域.其中辣根過(guò)氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)是最常用的標(biāo)記酶之一,它是從辣根中提取的,分子質(zhì)量為44kDa.HRP能催化過(guò)氧化氫(H2O2)
6、氧化某些還原性底物,生成有色物質(zhì),以此建立了光學(xué)酶[1-6]聯(lián)免疫和電化學(xué)酶聯(lián)免疫分析法等多種方法.共振光散射技術(shù)(resonancelightscattering,RLS)近幾年來(lái)發(fā)展迅速,具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)單的優(yōu)[7-12]點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)、DNA等生物大分子的分析.但利用RLS測(cè)定HRP的分析方法尚未見(jiàn)報(bào)道.HRP催化H2O2氧化四甲基聯(lián)苯胺(tetramethylbenzidine,TMB)生成自由基,并引發(fā)自由基的聚合生成聚收稿日期:2008-10-05基金項(xiàng)目:河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(B2006
7、000967)第一作者:李正平(1965-),男,河北易縣人,河北大學(xué)教授,博士生導(dǎo)師,主要從事分子發(fā)光及生化分析研究.?1994-2010ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net·174·河北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)2009年[7]四甲基聯(lián)苯胺的聚合物.該聚合物是具有共軛結(jié)構(gòu)的大分子,根據(jù)RLS理論應(yīng)具有較強(qiáng)的RLS信號(hào).據(jù)此筆者研究了檢測(cè)HRP的RLS分析方法.1實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器與試劑F24
8、500熒光分光光度計(jì)(日本日立公司);TU21901紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司);WH2861漩渦混合器(江蘇太倉(cāng)市科教器材廠);SZ293自動(dòng)雙重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠).TMB溶液:稱取0.0188gTMB(北京欣經(jīng)科試劑公司)溶于5mL無(wú)水乙醇中,用水稀釋至10mL,濃-3度為6×10mol/L;H
