不同程度的溶血對elisa檢測hbsab的影響

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1、不同程度的溶血對ELISA檢測HBsAb的影響【摘要】目的探討不同程度的溶血標本對ELISA檢測HBsAb結果的影響。方法分別用已知HBsAb陰性的血標本，人為造成不同程度的溶血，同時用酶聯免疫吸附試驗進行HBsAb的檢測；測定其OD值，通過對檢驗結果的觀察，分析溶血標本對酶聯免疫吸附試驗檢測的干擾程度。結果以標本的OD值≧1為陽性進行結果判讀。結果當樣本中游離血紅蛋白≧8g/L時，對酶聯免疫吸附試驗檢測有明顯的影響，可造成結果假陽性。結論用酶聯免疫吸附試驗進行HBsAb檢測時，如樣本游離血紅蛋白≧8g/L時，要重新取樣進行復查。【關

2、鍵詞】ELISA溶血標本酶聯免疫吸附試驗（ELISA)自1971年問世以來，以敏感性高、特異性強、操作簡便、安全等特點已被臨床廣泛使用，是最常用的乙肝病毒標志物的檢測技術。BBsAb陽性時機體獲得乙肝病毒免疫力的標志[1]，是觀察是否接種上乙肝疫苗的首要指標。ELISA法檢測要求樣本不使用高血紅蛋白的樣本，不能溶血，但在實際工作中由于穿刺、離心或病人血難抽等因素，常產生不同程度的溶血標本，這對檢測結果會產生一定的影響。本實驗通過人為造成標本不同程度的溶血，觀察對ELISA法檢測HBsAb結果的影響，現報告如下。1材料與方法1.1對象標

3、本來自本院健康體檢者182例，均為HBsAb陰性者，其中男性102人，女性80人。1.2試劑中生生物有限公司生產，批號為：20101002，質控血清是中生生物有限公司生產，批號為：20101002。1.3儀器與設備酶標儀為邁瑞MR-96，CD-1700血球計數儀。1.4方法早晨空腹抽取靜脈血4毫升，用震蕩方式造成不同程度的溶血，溶血程度以血漿游離血紅蛋白（FHb）為計。游離血紅蛋白用CD-1700血球計數儀測定，HBsAb用ELISA進行檢測，按要求進行嚴格質控。2結果已知HBsAb陰性標本在不同程度溶血對結果影響見表1。表1不同程度

4、溶血標本的HBsAb德檢測結果FHb例數HBsAb陰性HBsAb假陽性12525042626062323082321210241952022121030200204019019在FHb≧8g/L時，有假陽性發(fā)生3討論溶血是臨床檢驗中最常見的一種干擾和影響因素。溶血可分為體內溶血和體外溶血[2]。體內溶血可由物理因素（如人工心臟瓣膜或大血管手術后）、化學因素（如惡性瘧）和藥物毒性反應等因素引起。體外溶血可由物理因素（抽血時負壓過大、水浴溫度過高、冰凍、振蕩等機械性破壞）、化學因素（血樣接觸表面活性劑）和代謝因素（如遺傳病引起紅細胞脆性增

5、加）引起。在臨床上常見的引起標本溶血的原因包括[3]:由于病人嚴重脫水、低血容量休克等原因導致穿刺困難造成的溶血;由于抽血器具質量不合格如真空管負壓不夠或塑料試管質量較差導致的溶血;用干燥管采血為了盡快分離血清用竹簽攪拌不當引起的溶血等。溶血造成紅細胞破壞,胞內血紅蛋白等物質和細胞內液進入血清,對ELISA的影響主要是溶血血清中的血紅蛋白的非特異性吸附和溶血時細胞內液對血清的稀釋作用[4]。ELISA反應原理基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記，結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫活性，酶標記的抗原或抗體即保留其免疫學活

6、性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應，用洗滌的方法使固相載體上形成抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開,再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關?？筛鶕躺纳顪\進行定量或定性分析。由于酶的催化效率很高,間接放大了免疫反應的結果,使測定方法達到很高的敏感度。臨床實驗中用ELISA法檢測HBsAb，其主要酶為辣根過氧化物酶，而Hb中具有類過氧化物酶活性，其作用與

7、辣根過氧化物酶相似，均能催化底物成為有色產物。當樣本溶血時，紅細胞破裂，釋放出Hb，如果反應孔因非特異性吸附血紅蛋白而殘留,則類過氧化物酶與底物發(fā)生反應使本底OD值升高,甚至造成檢測結果假陽性。如果反應板孔包被、洗滌、封閉等質量好，操作正規(guī)，則可能大大減少或排除非特異性吸附的干擾[5]。在本實驗中，當HB8g/L時，結果無影響，這可能因為紅細胞破壞較少，釋放出的類過氧化物酶較少的緣故，隨著FHb的增高，8g/LFHb40g/L時，類過氧化物酶逐步增多導致假陽性的發(fā)生。HBsAb對乙肝病毒侵襲具有免疫力，被認為是保護性抗體，是疾病恢復、

8、預后良好的血清學標志。在臨床治療和預防接種中起有十分重要的作用。我們在進行HBsAb檢測時，要注意樣本外觀，雖然溶血會對HBsAb造成假陽性的影響，但對輕微溶血樣本（FHb8g/L），可發(fā)報告，以免重新抽血給病人造成痛苦