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1、中國衛(wèi)生檢驗雜志2008年10月第18卷第l0期ChineseJoumMofHealtIlLab0raIoryIkhn0l。科，Oct2008；Vol18No102161【經(jīng)驗交流】溶血對ELISA方法檢測HIV抗體的影響張利泉，楊杰，孟淑欣(山東省蓬萊市衛(wèi)生防疫站，山東蓬萊~5600)[關(guān)鍵詞]ELISA；溶血；HIV；檢測[中圖分類號】R446．6[文獻標識碼】C[文章編號】1004—8685(2~8)10—2161-02酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)因其敏感性高、特異性強、操1．3統(tǒng)計學處理作簡便、重復性好而且不需要昂貴的儀器而得到廣泛使用，用S~S15．0進行
2、雙因素統(tǒng)計學分析，計算溶血程度和溶《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》規(guī)定EMSA方法為艾滋病篩查實血標本保存時間長短的P值，P<0．05為具有統(tǒng)計學意義，即驗室進行初篩試驗的標準方法。在日常工作中經(jīng)常會遇到溶影響EHSA試驗對HIV—Ab的檢測結(jié)果。血標本，標本溶血后會釋放出血紅蛋白，血紅蛋白中的亞鐵血紅素具有過氧化物酶樣作用，可能造成試驗的假陽性，本文就2結(jié)果溶血對EMSA方法檢測HIV抗體的影響進行分析?。每種試劑(A、B)檢測結(jié)果的陽轉(zhuǎn)率(陰性轉(zhuǎn)為陽性)如表I、2，①A試劑：除了>looHbg／L外其他的溶血程度都出現(xiàn)了1材料和方法不同數(shù)量陽轉(zhuǎn)的情況，不同的保存時問也都
3、出現(xiàn)了陽轉(zhuǎn)的情1．1材料況；②B試劑：不管是在不同的溶血程度還是在'不同的保存時1．1．1標本間上都出現(xiàn)了一定的陽轉(zhuǎn)情況。1．1．1．1標本采集：收集食品從業(yè)人員正常健康查體為乙肝、應(yīng)用雙因素方差進行統(tǒng)計學分析如表3、4(a因素代表不丙肝等陰性且實驗過程中沒有出現(xiàn)過假陽性的非溶血標本，同的溶血程度，b因素代表不同的保存時間)，①A試劑：a因目的是排除實驗過程中能夠引起EHSA方法假陽性的其他非素的P=0．250>0．05，b因素的P：0．250>0．05；②B試劑：a溶血因素。因素的P=0．826>0．05，b因素的P=0．510>0．05。1．1．1．2溶血標本的制
4、備：將收集的標本進行一次HIV—Ab初篩，選擇初篩為陰性的標本(排除HIV陽性標本和進一步排表1試劑A檢測陽轉(zhuǎn)率(％)除實驗過程中能夠引起ELISA方法假陽性的其他非溶血因素)。以物理震蕩和反復凍融等物理方法造成不同程度的溶血，然后分離血清和血細胞以保證溶血程度的穩(wěn)定防止進一步溶血，以氰化高鐵法測得血紅蛋白的濃度用以表示溶血的程度，以16Hbg／L和l0oHbg／L為界分為3組，并且按照溶血后保存時間的長短分為3組，共9組，每組70份J。1．1．2試劑選擇全國排名前六位、批檢合格、在有效期內(nèi)并且明確標明使用辣根過氧化物酶作為標記物的A、B二種試劑。1．1．3儀器美國S
5、TATFAX2600酶標洗板機、美國STATFAX2100全自動酶標儀，儀器均經(jīng)過計量技術(shù)監(jiān)督局檢定合格，符合《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》要求。1．2方法1．2．1操作方法嚴格按照試劑盒使用說明書進行操作，試驗設(shè)陽性對照2孑L，陰性對照3孔，外部質(zhì)量控制2孔，每份樣品每次試驗做兩孔。1．2．2結(jié)果判斷按照試劑盒使用說明書的要求進行雙波長a2．6672l_3332．O0o．250檢測，兩孔OD值均大于Cut—ofr值判定檢測結(jié)果為陽性，兩b2．66721．3332．000．250孔OD值均小于Cut一值判定檢測結(jié)果為陰性，一孔OD值大于Cut一值一孔OD值小于Cut一0Ⅱ
6、值則判定為無效，目的是為了排除實驗過程中操作原因引起的假陽性。[作者簡介]張利泉(1979一)，男，本科，技師，主要從事艾滋病檢測工作。2162中網(wǎng)衛(wèi)生榆驗雜志2008年10月第l8卷第lO期ChineseJoumMofHeathLaborato~Teehndogy，Oct2008；Vol18No103討論高，如果在此時合并其他影響因素很有可能會使得標本的OD隨著技術(shù)的進步，ELISA試劑盒的敏感性和特異性都有了值超過Cut—of值，導致試驗結(jié)果的假陽性J。根據(jù)《全國艾顯著的提高，但是實驗原理、試驗條件及操作人員等因素都會滋病檢測技術(shù)規(guī)范》，如果試驗中出現(xiàn)陽性，陽性標
7、本要送艾對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。如表3、4所示對A、B兩種試劑的檢測滋病檢測確認實驗室進行確認，這必然造成人力物力的浪費，結(jié)果進行雙因素方差分析，兩種試劑兩種因素的P值均>因此我們在采血和血液標本的運輸過程中應(yīng)當避免標本溶0．05無統(tǒng)計意義，也就是說理論上不同的溶血程度和溶血標血，但是日常工作中溶血標本是不可能完全避免的，因此實驗本保存不同的時間對ELISA方法的實驗結(jié)果是不會產(chǎn)生影響室接到溶血標本之后，應(yīng)當盡快分離血清，防止溶血的進一步的。但是如表l、2所示，不同的溶血程度下A、B兩種試劑都加重。對溶血標本的檢測，建議采取兩孔平行試驗，如果試驗出現(xiàn)了極
