忍冬藤葉中綠原酸的分離純化工藝研究

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1、忍冬藤葉中綠原酸的分離純化工藝研究【摘要】目的研究忍冬藤葉中的綠原酸分離純化工藝。方法用靜態(tài)吸附法考察不同大孔樹脂的吸附、解吸性能，并以綠原酸保留率為指標(biāo)，采用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對忍冬藤葉中綠原酸的分離純化工藝條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果綜合考慮，最佳大孔樹脂為LSA-21，溶媒濃度為25％，溶媒為2BV，洗脫流速為0.6BV·h-1。結(jié)論該工藝合理，穩(wěn)定可行，可用于工業(yè)化推廣。【關(guān)鍵詞】忍冬藤葉；分離純化工藝；大孔吸附樹脂；正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)；綠原酸Abstract：ObjectiveTostudythepurificationof

2、Chlorogenicacidintacroporousresinpropertiesofabsorptionanddesorptionethod.ance,andtheoptimumconditionsasfolloountofsolution，theflo，4.6mm×250mm;大連依利特）；柱溫35℃；流動相為乙腈-0.4％磷酸（13∶87）；檢測波長327nm；流速1.0ml·min-1；理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于1000。2.1.2對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品17.80mg，置25ml棕色量瓶中，加

3、50%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取1ml，置10ml棕色量瓶中加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，貯存于棕色量瓶并置4℃冰箱，備用。2.1.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密量取綠原酸對照品溶液1，2，3，4，5，6ml置10ml容量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，依次精密吸取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以進(jìn)樣量（X）對峰面積A作線性回歸，回歸方程為：A=1.5659×106X+8319.3,r=0.9999，可知綠原酸在0.2236～1.3416μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。2.1.4原藥材含量測定取樣品適量，粉碎成

4、粗粉，分別稱取3份各0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，稱定重量，超聲30min，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，精密吸取對照品溶液與樣品濾液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。用外標(biāo)法，以峰面積計(jì)算樣品中綠原酸的含量，結(jié)果平均含量按質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)為18.40mg·g-1。2.2上柱前樣品溶液的制備取忍冬藤葉粗粉1kg，以流速為12ml·kg-1·min-1，溶媒為40％乙醇滲漉，收得8倍量滲漉液,回收乙醇，精密測定殘留液體積并依法測定綠原酸含量，備用。

5、2.3不同型號的大孔吸附樹脂對綠原酸吸附、解吸能力的比較稱取10g預(yù)處理好的大孔吸附樹脂置于100ml錐形瓶中，加入一定量提取液，浸漬24h，不時振搖，依法測定含量，并根據(jù)公式(1)［3］計(jì)算吸附量及吸附率。在吸附飽和的10g樹脂中，加入50ml90%乙醇，不斷振搖，依法測定含量，根據(jù)公式(2)［3］計(jì)算解吸量和解吸率。結(jié)果見表1。Qa＝(Co-Ce)×V/g·ml-1)；C0-吸附液起始濃度(mg·ml-1)；Ce-吸附液平衡濃度(mg·ml-1)；V-溶液體積(ml)；g·ml-1)；Qd一解吸量(mg·ml-1；Ed-

6、解吸率（％）表1大孔吸附樹脂對綠源酸吸附、解吸附能力比較結(jié)果表明，LSA-21吸附量與解吸量最大，LSA-80與HPD-100A吸附量也較大，但解吸量稍低于LSA-21，以吸附量和解吸量為參考指標(biāo)，綜合考慮最佳大孔吸附樹脂為LSA-21。2.4優(yōu)化分離純化工藝參數(shù)2.4.1正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為優(yōu)化分離、純化工藝參數(shù)，在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用L9（34）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以綠原酸保留率為指標(biāo)，考察乙醇濃度、收集量、洗脫流速對LSA-21分離、純化效果的影響。因素與水平見表2。表2因素水平水平A乙醇濃度（%)B收集量/BVC洗脫流速/BV·

7、h-112510.423520.634530.82.4.2實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果取已處理好的大孔樹脂裝柱，依生產(chǎn)企業(yè)實(shí)際生產(chǎn)情況，固定大孔吸附樹脂柱徑高比為1∶4。分別取忍冬藤葉滲漉液9份各80ml，上樣，均先用1BV蒸餾水洗脫，固定水洗脫流速0.8BV·h-1，水洗脫液另存；然后依L9（34）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)安排表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，收集醇洗脫液，搖勻，精確測定體積，依法測定綠原酸含量并計(jì)算保留率（％）。結(jié)果見表3，方差分析見表4。由表3～4可知，對綠原酸保留率的影響因素依次是B＞C＞A，其中因素B有顯著性影響，最佳工藝條件為A3B3C2?？紤]

8、到A1與A3、B2與B3水平對綠原酸保留率影響相近，本著降低成本的原則，確定優(yōu)化工藝為A1B2C2，即溶媒為25％乙醇，收集洗脫液2BV，洗脫流速為0.6BV·h-1。表3正交實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果表4正交實(shí)驗(yàn)方差分析2.5驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步考察上述最佳工藝的穩(wěn)定性和合理性，按該工藝條件進(jìn)行重復(fù)性實(shí)