加味四君子湯對小鼠腸道免疫功能調(diào)整作用的研究

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1、加味四君子湯對小鼠腸道免疫功能調(diào)整作用的研究【摘要】　　目的觀察加味四君子湯和思密達對小鼠腸道免疫功能的調(diào)整作用。方法鹽酸林可霉素灌胃建立小鼠腸道菌群失調(diào)及免疫功能紊亂模型。昆明種鼠隨機分6組，正常對照組、自然恢復(fù)組、造模組、思密達組、加味四君子湯組和兩藥合用組，分別進行腸道菌群檢測、小腸黏液中sIgA的測定、血清中IL-2的測定及腸通透性(尿液中乳果糖與甘露醇比值)的檢測。結(jié)果鹽酸林可霉素灌胃3d小鼠，腸道菌群失調(diào)，sIgA從正常對照組的14.54mg/ml增加到18.70mg/ml，IL-2從正常對照組的1186.65mg/ml降低到1

2、111.58mg/ml、L/M從正常對照組的1.27增加到1.37mg/ml。實驗組分別給加味四君子湯、思密達及兩藥合用后，腸道菌群得以調(diào)整，sIgA含量從18.70mg/ml降低到14.52mg/ml，IL-2的含量從1111.58mg/ml增加到1189.58mg/ml，腸黏膜通透性減小。各治療組間比較，加味四君子湯和思密達合用組優(yōu)于加味四君子湯組和思密達組。結(jié)論加味四君子湯和思密達均能修復(fù)受損黏膜，有調(diào)節(jié)腸道免疫功能的作用，但加味四君子湯在調(diào)整失調(diào)的菌群方面優(yōu)于思密達，兩藥合用給藥則能起到最佳效果?！娟P(guān)鍵詞】腸道菌群；加味四君子湯；腸

3、道免疫；腸通透性正常腸道屏障功能依賴于腸黏膜上皮屏障、腸道免疫系統(tǒng)以及腸道的正常微生物的平衡［1］。近年來，很多學(xué)者開始研究四君子湯對腸道菌群的調(diào)整作用，鞠寶玲、李儉等［2，3］研究表明四君子湯可以改善脾虛大鼠胃腸黏膜的異常形態(tài)，使其恢復(fù)正常，并對雙歧桿菌和乳酸桿菌有明顯的增菌作用，從而調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)，治療由腸道菌群失調(diào)導(dǎo)致的一系列疾病，李莉等［4］研究了加味四君子湯對腸道菌群失調(diào)小鼠的調(diào)整作用，效果顯著。本文探討山藥加入四君子湯對腸道菌群的調(diào)整及機體免疫功能的調(diào)整作用?！　?材料與儀器　　1.1動物清潔級昆明種小鼠（合格證號：SCXK2

4、005-0001），體質(zhì)量18～22g，雌雄各半，由河南省實驗動物中心提供。　　1.2藥物與試劑鹽酸林可霉素（300g/L）,上海旭東海普藥業(yè)有限公司，批號：070509；思密達，博福-益普生制藥有限公司，批號：S0293；中藥：人參、山藥、白術(shù)、茯苓、甘草，購于張仲景大藥房，將上述中藥按2∶2∶2∶2∶1混合，水提取，過濾濃縮至1g/ml生藥量；生理鹽水，山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司；乳果糖（遼寧省丹東市康復(fù)制藥廠）；甘露醇（北京化工廠，進口分裝）；甲基甘露糖苷（SIGMA）；吡啶（FLUKA）；羥基鹽酸鹽（SIGMA）；n-三甲基硅烷咪唑（

5、SIGMA）　　1.3培養(yǎng)基EMB（伊紅美蘭培養(yǎng)基），用于腸桿菌的分離培養(yǎng)；EC（腸球菌選擇性培養(yǎng)基）；LBS（乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基）；BD（類桿菌選擇性培養(yǎng)基）；Blb（雙歧桿菌選擇性培養(yǎng)基），培養(yǎng)基的配制參考　　3結(jié)果　　3.1腸道菌群的定量檢測見表1。小鼠經(jīng)鹽酸林可霉素灌胃后，與正常對照組相比，5種腸道菌群發(fā)生顯著變化，其中雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸桿菌數(shù)量顯著降低，而腸球菌、類桿菌數(shù)量有所升高。經(jīng)各組治療后，各種細(xì)菌基本恢復(fù)到正常水平，其中加味四君子湯組效果最好，與正常對照組已無差異（P＞0.05）。表1小鼠經(jīng)鹽酸林可霉素灌胃和藥物處理

6、后腸群檢測結(jié)果(略)　　3.2sIgA和IL-2的測定結(jié)果見表2。小鼠經(jīng)鹽酸林可霉素灌胃后，sIgA增高，IL-2降低，經(jīng)加味四君子湯和思密達治療后，sIgA和IL-2的含量趨于恢復(fù)到正常水平，其中以加味四君子湯和思密達組恢復(fù)的最好。　　3.3尿液中L/M的測定正常對照組的小鼠尿液中L/M的峰面積比值為1.27（54494.88±1269.08/42973.02±1266.39）。結(jié)果見圖1，而灌胃3d鹽酸林可霉素后，L/M的峰面積值升高到1.37（58894.883±1627.90/42988.966±741.20）。見圖2。表2小鼠經(jīng)鹽

7、酸林可霉素灌胃和藥物處理后小腸黏液sIgA和血清IL-2含量測定結(jié)果(略)　　4討論乳果糖通過小腸黏膜上皮細(xì)胞的緊密連接處吸收，乳果糖的吸收與小腸黏膜上皮細(xì)胞的緊密連接完整程度成反比；甘露醇通過小腸上皮細(xì)胞膜上的水溶性微孔吸收。兩者在小腸內(nèi)不代謝，直接吸收入血，然后由尿中排出，可從尿中進行定量測定其吸收量。如果尿中L/M的值升高，即表明上皮細(xì)胞間的結(jié)構(gòu)已發(fā)生改變，黏膜的通透性增加。本文結(jié)果表明，小鼠經(jīng)鹽酸林可霉素灌胃后，L/M值增高，黏膜有損。經(jīng)加味四君子湯和思密達治療后，L/M值又降低到正常水平，黏膜的通透性降低。黏膜通透性降低表明破損的

8、黏膜已經(jīng)基本得到修復(fù)，這與腸道菌群的調(diào)整也有很多關(guān)系。近年來，國外學(xué)者［7］采用多種糖來檢測胃腸道黏膜的通透性，其中比較常見的為三氯蔗糖，它可以全面反映胃腸道的通透性，對于其在本